Met-mutanterne er Met auxotrofer, hvilket betyder, at de ikke kan vokse i medier, der ikke indeholder Met. Auxotrofer er mikroorganismer, der ikke er i stand til at syntetisere et essentielt næringsstof på grund af en genmutation. Mange laboratoriestammer bærer flere mutationer, der forstyrrer syntesen af essentielle næringsstoffer. F.eks. fordi BY4742-stammen bærer mutationer i HIS3-, LEU2-, LYS2- og URA3-generne, vil stammen kun vokse i medier, der indeholder histidin, leucin, lysin og uracil. Auxotrofe stammer har mange anvendelsesmuligheder inden for genetik. Forskere bruger ofte auxotrofe stammer som værter for plasmidtransformation (kapitel 12). De plasmider, der anvendes til transformation, bærer funktionelle alleler af et gen, der er defekt i værtsstammen, hvilket gør det muligt at udvælge transformanter ud fra deres evne til at vokse på medier, der mangler det essentielle næringsstof.
Syntetiske medier er et vigtigt redskab til dyrkning og undersøgelse af auxotrofe organismer, fordi alle komponenterne er definerede. Gærforskere har udviklet en række forskellige formuleringer til syntetiske medier. Alle syntetiske medier indeholder en kulstofkilde (normalt D-glucose), en kvælstofkilde og essentielle vitaminer og mineraler. Vitaminerne og mineralerne købes normalt
i en formulering, der er kendt som gær nitrogen base (YNB). De kosttilskud, der tilsættes syntetiske medier, kan skræddersys til at understøtte eller modvirke væksten af bestemte genotyper. I dette kursus vil vi anvende mediet Yeast Complete (YC), som understøtter væksten af de fleste S. cerevisia-stammer. Væksthastigheden for vildtypestammer i YC er noget langsommere end i rige medier som YPD, men stammerne er levedygtige i lange perioder. Tabellen på næste side viser sammensætningen af YC, som indeholder en rig forsyning af aminosyrer og nukleotidbaser. Ud over det komplette YC-medium vil vi også anvende selektive medier, hvor nogle af komponenterne er udeladt. I dette forsøg vil vi f.eks. bruge YC-Met “drop-out”-medie, som indeholder alle YC-komponenterne i nedenstående tabel, undtagen methionin.
