Autoradiografi

Autoradiography

Autoradiografi af en Southern Blot

Autoradiografi er en klasse af teknikker, hvor positionerne af radioisotop-mærket biologisk materiale giver et autoradiogram (“selvbillede”). Radioisotoper som f.eks. 14C, 32P og 35S udsender stråling, der eksponerer fotografisk film eller røntgenfilm. Substitution af 32P i DNA’s rygrad eller 35S i de svovlholdige aminosyrer gør det muligt at påvise mærkede molekyler.

Et Southern Blot-filter anbringes i en lyssikker kasse (til venstre) og overlejres med et ark røntgenfilm. Kassetten lukkes og stilles i flere timer til flere dage. Det radioisotopmærkede DNA eksponerer filmen, som, når den er fremkaldt, viser et mønster af sorte bånd, der angiver positionerne af det mærkede DNA i blottet. I tre af de fire hjørner er der lavet markeringer med en speciel blæk, som også eksponerer filmen. Ved hjælp af de tre indeksmærker kan klumpen justeres i forhold til filmen (med tre mærker er der kun én justering mulig). I nogle forsøg kan justeringen bruges til at lokalisere et bestemt DNA-bånd på pletten og skære det ud for at genvinde DNA’et til yderligere forsøg.

Skriv en kommentar