Formål: For nylig er flere reverse transkription-PCR-teknikker blevet vist at være nyttige til påvisning af cirkulerende mikrometastaser. På denne måde kunne intakte celleklynger, der blev fundet i dyreforsøg af prognostisk værdi, imidlertid ikke påvises. I denne undersøgelse blev der foretaget en evaluering og ændring af en kommerciel, cytokeratinbaseret, immunomagnetisk celleseparationsmetode til påvisning af intakte celleklynger i patienter med kolorektalcarcinom.
Forsøgsdesign: 32 tyktarmskræftpatienter (6 var i Dukes stadie B, 13 i stadie C og 13 i stadie D) og 20 sunde donorprøver blev evalueret. Immunomagnetisk celleseparation blev udført fra buffy coat af perifere blodprøver (20 ml) ved hjælp af Carcinoma Cell Enrichment Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Tyskland), idet man undgik alle filtreringstrin. Den berigede cellefraktion blev cytocentrifugeret og immuncytokemisk mærket ved hjælp af et pancytokeratin-antistof (MNF116; Dako).
Resultater: Af 20 sunde prøver indeholdt 2 en cytokeratin-positiv celle. Af 32 enkeltprøver fra maligne tilfælde viste 24 cytokeratin-positive celler. Der blev påvist tumorcelleklynger, blandede celledoubletter (en cytokeratin-positiv og -negativ celle) og blandede celleklynger hos 22 ud af 24 patienter. I seks tilfælde blev der påvist cytokeratin-positive dendritiske lignende celler. Opfølgningsdata viser, at kemoterapi ikke kan ødelægge alle de cirkulerende tumorcelleklynger.
Konklusioner: Ved hjælp af de præsenterede metoder kunne vi påvise cirkulerende tyktarmskræftceller og celleklynger hos tyktarmskræftpatienter. Lignende cellestrukturer er tidligere kun blevet beskrevet hos rotter. De foreliggende data beviser, at sådanne strukturer også findes i kolorektal cancer hos mennesker.