Den anti-kataboliske rolle af bovin lactoferricin i brusk

Bovin lactoferricin (LfcinB) er et multifunktionelt peptid, der stammer fra bovin lactoferrin, og som udviser antibakterielle, svampebekæmpende, antivirale, antitumor- og immunmodulerende aktiviteter. På det seneste har undersøgelser fokuseret på LfcinB’s anti-kataboliske og anti-inflammatoriske potentiale. LfcinB er i stand til at modulere virkningerne af cytokiner som IL-1 og fibroblastvækstfaktor 2 samt at fremme specifikke bruskanabolske faktorer. Disse egenskaber er særligt vigtige for opretholdelse af bruskens homøostase og forebyggelse af en katabolisk tilstand, som fører til klinisk patologi. Denne gennemgang fokuserer på den nyere litteratur, der belyser LfcinB’s rolle i forebyggelsen af brusknedbrydning.

Indledning

Bruskdegenerative sygdomme som osteoarthritis (OA) i leddene og degenerativ diskusprolaps (DDD) i rygsøjlen er udbredte sygdomme, der har en betydelig indvirkning på dagens samfund. OA er den vigtigste årsag til invaliditet i den ældre befolkning (1), og DDD bidrager til den invaliderende karakter af kroniske rygsmerter (2-4). På nuværende tidspunkt er patogenesen for disse to tilstande stort set ukendt, men begge involverer en progressiv forringelse og nedbrydning af bruskvæv. Nyere litteratur har fokuseret på at forstå mange af de patofysiologiske processer, der er involveret i brusknedbrydning, med henblik på at udvikle nye terapier, der har til formål at bremse og/eller vende disse sygdomme.

Under normale forhold opretholder både ledkirtelkondrocytter og intervertebrale diskusceller (IVD) en dynamisk ligevægt mellem syntese og nedbrydning af ekstracellulær matrix (ECM)-komponenter (5, 6). I degenerative tilstande er der en forstyrrelse af matrixligevægten, hvilket fører til progressivt tab af bruskvæv, undertrykkelse af proteoglykanproduktion (PG) og klonal ekspansion af celler i de udtømte områder. Chondrocytmetabolismen er ubalanceret på grund af overdreven produktion af kataboliske mediatorer, herunder matrixmetalloproteaser (MMP), aggrecanaser (ADAMTS) og andre cytokiner og vækstfaktorer, der frigives af chondrocytter, som bidrager til ødelæggelsen af ECM (7-9). Derfor kan identifikation af nye vækstfaktorer eller mediatorer, der biokemisk undertrykker de kataboliske og/eller anti-anaboliske veje, der er involveret i brusknedbrydning, flytte homøostasen mod en pro-anabolisk tilstand, hvilket potentielt kan tjene som en terapeutisk strategi til at bremse både OA og DDD.

Interessant nok har flere nyere undersøgelser afsløret potentialet for glykoproteinet bovin lactoferricin (LfcinB) og dets forløber bovin lactoferrin (bLf) til at inducere anti-kataboliske, pro-anaboliske og anti-inflammatoriske virkninger i brusk. bLf blev først identificeret i kvægmælk i 1939 (10) og er et 80 kDa-glykoprotein, der findes i slimhindesekretioner, synovialvæsker, plasma og neutrofile granula (11) og spiller en nøglerolle i forskellige antibakterielle, antivirale, anticarcinogene og antiinflammatoriske veje (12). For nylig har bLF vist sig at have terapeutisk værdi i forbindelse med muskuloskeletale ætiologier. For eksempel undertrykte oral indgivelse af bLF i en adjuverende gigtmodel hos rotter udviklingen af gigt og hyperalgesi (13), hvilket tyder på dets anti-kataboliske og anti-inflammatoriske egenskaber i synoviale led. Disse resultater bekræftes af andre resultater, hvor periartikulære injektioner af human LF undertrykte lokal inflammation i en murin septisk arthritis-model (14).

LfcinB dannes ved pepsinmedieret spaltning af glykoproteinet bLf, et nøglemedlem af transferrinfamilien. LfcinB er blevet genfundet fra det sure maveindhold hos mennesker efter fordøjelse af bLf (15). I lighed med bLF udøver LfcinB en række forskellige virkninger i flere forskellige væv og organismer. De antibakterielle virkninger af LfcinB er allerede veldokumenteret. Når LfcinB frigøres fra sit moderprotein, transformeres det fra en α-helikal struktur til en amfipatisk β-hårnåle-struktur, hvilket gør det muligt for peptidet at binde til bakteriemembraner med høj affinitet (16). Når LfcinB er bundet, øger det cellemembranens permeabilitet og fremkalder dermed en bakteriedræbende virkning (17). Undersøgelser i andre biologiske systemer afslører også LfcinB-medierede svampedræbende, antiparasitære, antivirale, antitumor- og immunmodulerende virkninger (17-19) i lighed med bLf. I betragtning af deres strukturelle ligheder tyder disse resultater på, at det højst sandsynligt er den basiske hydrofobiske N-terminus af bLf (som indeholder LfcinB-restene), der er ansvarlig for disse fælles virkninger (20).

Denne gennemgang vil fokusere på de kraftige antikataboliske og antiinflammatoriske virkninger af LfcinB i både ledbrusk og IVD, hvilket fremhæver dets potentiale som et terapeutisk middel til OA og DDD i fremtiden.

Lactoferricin i ledbrusk

Kartilagehomeostase opretholdes ved en delikat balance mellem kataboliske og anabole veje. Når denne balance er forstyrret, dominerer de kataboliske veje ofte og fremkalder degeneration af brusk, hvilket klinisk manifesteres som OA. Virkningen af LfcinB på de kataboliske veje, der er forbundet med brusknedbrydning, blev først undersøgt af Yan et al. (21). I deres undersøgelse blev humant ledbrusk og synovium dyrket med IL-1β og fibroblastvækstfaktor 2 (FGF-2) (to molekyler, der er kendt for at drive katabolisme i ledbrusk) med eller uden LfcinB. De viste, at LfcinB potent hæmmer de kataboliske virkninger af både IL-1β og FGF-2. Især blev ekspressionen af matrixnedbrydende enzymer (dvs. MMP-1, MMP-3 og MMP-13) og ADAMTS’er (dvs. ADAMTS4 og ADAMTS5) nedreguleret på både mRNA- og proteinniveau i tilstedeværelse af LfcinB i humane ledkondrocytter og synoviale fibroblaster, der blev behandlet med IL-1β og FGF-2. Dette fund er vigtigt, da MMP’er og ADAMTS’er har vist sig at bidrage til brusknedbrydning (22), og det har været i fokus i flere undersøgelser at finde måder at mindske deres aktiviteter på (23, 24).

Yan og kolleger har også belyst, at LfcinB kan forstyrre de kataboliske aktiviteter af FGF-2 (også kendt som basisk FGF) ved potentielt at binde sig til heparansulfatproteoglykaner (HSPG’er) såsom syndecan 4 (21). Syndecan 4 letter bindingen af FGF-2 til FGF-receptoren på celleoverfladen. LfcinB’s evne til at binde til syndecan er tidligere blevet beskrevet. Mader et al. (25) fandt, at LfcinB binder sig til syndecan og forhindrer FGF-2 og vaskulær endothelial vækstfaktor (VGEF) i at binde sig til menneskelige og musenavendel endothelceller. Det foreslås, at en lignende mekanisme er til stede i ledbruskceller (21). LfcinB binder kompetitivt syndecan og forhindrer FGF-2 i at binde sig til sin ledcellereceptor og forhindrer dermed dens nedstrøms kataboliske og/eller anti-anaboliske signalkaskader (21).

Sammen med undertrykkelsen af kataboliske mediatorer hæmmer LfcinB også inflammatoriske mediatorer i ledbrusk (21). I ledbrusk nedsatte LfcinB ekspressionen af flere proinflammatoriske gener, såsom IL-6 og toll-like receptor 2 (TLR-2) i ledbrusk. IL-6 kan tilskynde til bruskdegeneration gennem autokrine og parakrine mekanismer, og TLR-2 tilskynder til et medfødt immunforsvar og inflammation i OA-led (26, 27). Desuden opregulerede LfcinB også antiinflammatoriske cytokiner, herunder IL-4 og IL-10 (21). Ved samtidig at modulere proinflammatoriske og antiinflammatoriske aktiviteter forårsagede LfcinB en samlet reduktion af inflammation i OA.

I en opfølgende undersøgelse karakteriserede Yan et al. (28) yderligere de signalveje, der anvendes af LfcinB, og opdagede endnu en anti-katabolisk mediator, der blev opreguleret i tilstedeværelse af LfcinB (28), nemlig vævsinhibitor af metalloproteinase 3 (TIMP-3). Dette fund er vigtigt, da TIMP-3 i modsætning til de andre medlemmer af TIMP-familien (TIMP-1-4) er en potent inhibitor med et relevant substratspektrum i bruskbiologi, herunder MT-MMP’er, ADAMTS4, ADAMTS5 og tumornekrosefaktorkonvertase (29, 30). I betragtning af at TIMP-3 er den eneste endogene inhibitor af ADAMTS’er (31), kan dette forklare, hvorfor LfcinB var i stand til at blokere PG-udtømning af IL-1β og FGF-2 ex vivo (19).

Selv om mange af de nedstrøms signalveje medieret af LfcinB fortsat er stort set ukendte, er nyere undersøgelser begyndt at afdække specifikke kaskader stimuleret af LfcinB i humant ledbrusk. Ved farmakologisk at hæmme ERK-, Akt- og p38-veje fastslog Yan et al. (28), at ERK-1/2-vejen formidlede de fleste aspekter af LfcinB-effekterne i ledkapselkondrocytter. Yderligere mekanistiske undersøgelser af LfcinB-induceret TIMP-3-transkription afslørede en væsentlig rolle for transkriptionsfaktoren Sp1 (32, 33). Sp1 hører til det centrale transkriptionelle maskineri under TIMP-3-induktion, fordi knocking down Sp1 ophæver LfcinB-induceret TIMP-3-ekspression (32). Interessant nok var Sp1 også kritisk for TGF-β-medieret TIMP-3 produktion (33), hvilket tyder på, at dette transkriptionsprogram kan aktiveres af forskellige signalinput.

I en endnu ikke offentliggjort undersøgelse viser Yan et al. yderligere, at det antiinflammatoriske cytokin IL-11 blev dramatisk opreguleret af LfcinB. Denne forøgelse af IL-11 var et resultat af aktivering af ERK-1/2-vejen, som efterfølgende aktiverede c-Fos/JunD-heterodimeren for at initiere transkription. Induceret IL-11 stimulerede derefter antiinflammatoriske såvel som antikataboliske kaskader via induktion af TIMP-1 på en Stat3-afhængig måde.

Baseret på disse undersøgelser opstiller vi den hypotese, at LfcinB fremmer antiinflammatoriske og antikataboliske aktiviteter via tre mekanismer (Figur 1): (i) kompetitiv binding af LfcinB til HSPG’er, hvilket forhindrer effektiv IL-1- og FGF-2-signalering; (ii) induktion af TIMP-3 for at begrænse endogene proteolytiske aktiviteter; og (iii) induktion af beskyttende cytokiner, især IL-11, som fremmer antiinflammation og anti-katabolisme. Selv om disse undersøgelser har dannet grundlag for forståelsen af LfcinB’s rolle i ledbrusk, er der behov for yderligere undersøgelser for at dissekere de nøjagtige veje og målgener, der reguleres af LfcinB.

Lactoferricin i IVD-celler

Et andet område, hvor LfcinB har vist sig meget lovende som en potentiel terapeutisk mulighed, har været i forbindelse med degeneration af nucleus pulposus (NP) i IVD. Ligesom ledbrusk afhænger opretholdelsen af NP-vævets homøostase af en balance mellem anabole og kataboliske processer. Når denne balance ændres, indledes degeneration af IVD, hvilket potentielt kan kulminere i kroniske rygsmerter for patienten.

Kim et al. (34) undersøgte virkningerne af LfcinB på IVD i bovint såvel som humant væv. De påviste, at tilsætning af LfcinB til en kultur af NP-celler førte til en stigning i PG-syntesen. En af de mekanismer, hvorved LfcinB øgede PG-syntesen, var gennem opregulering af SOX-9. SOX-9 er en vigtig transkriptionsfaktor, som har vist sig at øge aggrecan- og kollagen type II-ekspressionen i bovine NP-celler (35, 36). Celler, der er dyrket med LfcinB, har næsten 2,5-3,0 gange større koncentrationer af SOX-9 afhængigt af LfcinB-dosis sammenlignet med celler uden LfcinB, hvilket viser dets evne til at fremme anabole veje i bovint NP-væv (34). Ud over fremme af SOX-9 er der beviser for undertrykkelse af vigtige brusknedbrydende enzymer, herunder MMP-1, MMP-13 og ADAMTS5. Denne undertrykkelse blev suppleret med fremme af flere TIMP’er, herunder TIMP-1, TIMP-2 og TIMP-3, hvilket yderligere underbygger LfcinB’s anti-katabolske rolle (34). Endelig blev de signalveje, hvorigennem LfcinB udøver sine anabole virkninger, belyst. Aktiveringen af undergrupper af mitogen-aktiveret proteinkinase (MAPK) (ERK, p38 og JNK) blev evalueret, og kun ERK- og p38-vejene aktiveres ved tilstedeværelse af LfcinB, mens JNK-vejen ikke blev aktiveret på noget tidspunkt (34). Omfanget af involvering af hver aktiveret vej blev vurderet ved hjælp af specifikke farmakologiske inhibitorer. Inhibering af p38-vejen fører til et signifikant fald i aggrecan-geninduktion til under niveauet i kontrolgruppen. Hæmning af ERK-vejen førte også til et fald i aggrecan-induktion, men ikke i samme omfang som p38-hæmning (34).

Ellman et al. (37) undersøgte yderligere den signalvej, hvorigennem LfcinB virker, og identificerede et synergistisk forhold mellem LfcinB og en anden anabolsk mediator: bone morphogenetic protein 7 (BMP-7). I deres undersøgelse førte behandling af bovine IVD-celler med kombinationen af LfcinB og BMP-7 til en større stigning i PG-akkumulering og -syntese samt aggrecan-geninduktion. De foreslog, at den synergistiske mekanisme var resultatet af en fælles aktivering af SMAD-1/5/8 af både BMP-7 og LfcinB (38, 39). LfcinB nedregulerede også SMAD-6 (en potent inhibitor af SMAD-1/5/8) såvel som Noggin (en inhibitor af BMP-7) (37). Reduktionen af disse hæmmende faktorer gør det muligt for LfcinB at fjerne den negative feedback på BMP-7 og give mulighed for maksimalt anabolsk bidrag fra BMP-7. Forfatterne konkluderede, at denne kombination potentielt kunne anvendes klinisk til forebyggelse og behandling af IVD-degeneration (37).

En yderligere indsigt i den antiinflammatoriske natur af LfcinB i IVD gives af en opfølgende undersøgelse af Kim et al. (40). Denne undersøgelse fokuserede primært på interaktionen mellem LfcinB og de inflammatoriske mediatorer IL-1 og endotoxin lipopolysaccharid (LPS). Både IL-1 og LPS har vist sig at være potente inflammatoriske mediatorer, der fører til degeneration af IVD-celler (41, 42). Kim et al. (40) viste gennem deres forsøg, at LfcinB inducerer en stigning i den pericellulære matrixdannelse, når det tilsættes til bovine IVD-kulturer. Denne anabole virkning var så kraftig, at tilsætningen af LfcinB reddede den undertrykte pericellulære matrixdannelse i tilstedeværelse af IL-1 og LPS. Tilsætningen af LfcinB undertrykte også den IL-1- og LPS-medierede produktion af MMP-1, MMP-3, MMP-13 og ADAMTS-5, som har vist sig at være involveret i diskusdegeneration. Endelig førte tilsætning af LfcinB til IVD-kulturer, der indeholdt IL-1 og LPS, til en dæmpning af TLR-2- og TLR-4-opregulering. TLR-2 og TLR-4 har vigtige regulerende funktioner i de inflammatoriske og oxidative veje, der fører til degeneration af IVD (27, 43). Evnen til at undertrykke ekspressionen af TLR’erne såvel som de andre kataboliske mediatorer viser et potent anti-katabolisk potentiale af LfcinB i IVD.

Kim et al. (40) undersøgte også det terapeutiske potentiale af LfcinB ved at undersøge ex vivo-organkulturer af IVD fra New Zealand White Rabits og mus. Forud for dyrkningen blev skiverne injiceret en bloc med LfcinB (200 μg pr. kaninskive og 100 μg pr. museskive). LfcinB- og kontrolskiverne uden LfcinB-injektion blev dyrket i et medium, der indeholdt IL-1, LPS eller ingen af delene. Skiverne uden LfcinB-injektion havde en betydelig PG-udtømning i nærvær af IL-1 og LPS samt nedsat cellularitet i den pericellulære matrix. De LfcinB-injicerede skiver viste en dæmpning af virkningen af IL-1 og LPS. Dette resultat er vigtigt for at demonstrere LfcinB’s potentiale som et terapeutisk middel mod de kataboliske aktiveringer af IL-1 og LPS i IVD.

Slutning

Lactoferricin er et molekyle, der har vist sig at have flere funktioner i forskellige biologiske systemer. Dets rolle i muskuloskeletalsystemet er først lige begyndt at blive belyst. Især LfcinB’s antiinflammatoriske og anti-kataboliske egenskaber gør det til en attraktiv mulighed for behandling af DDD og IVD-degeneration. Begge disse patologiske processer er resultatet af kraftige inflammatoriske og kataboliske mediatorer, der forskyder den homøostatiske balance i retning af katabolisme. Der er behov for yderligere undersøgelser for at klarlægge de nøjagtige mekanismer og veje, der aktiveres af LfcinB; men potentialet for LfcinB som en terapeutisk mulighed i OA og DDD viser store løfter.

1. Buckwalter JA, Saltzman C, Brown T. The impact of osteoarthritis: implications for research. Clin Orthop Relat Res 2004; 427: S6-15. Søg i Google Scholar

2. Buckwalter JA. Aldring og degeneration af den menneskelige intervertebrale diskus. Spine 1995; 20: 1307-14. Søg i Google Scholar

3. Andersson GB. Epidemiologiske træk ved kroniske lænderygsmerter. Lancet 1999; 354: 581-5. Søg i Google Scholar

4. Freemont TJ, LeMaitre C, Watkins A, Hoyland JA. Degeneration af intervertebrale diskusskiver: nuværende forståelse af cellulære og molekylære hændelser og konsekvenser for nye terapier. Expert Rev Mol Med 2001; 3: 1-10. Søg i Google Scholar

5. Goldring MB. Kondrocytens rolle i osteoartritis. Arthritis Rheum 2000; 43: 1916-26. Søg i Google Scholar

6. Masuda K, Imai Y, Okuma M, Muehleman C, Nakagawa K, Akeda K, Thonar E, Andersson G, An HS. Osteogen protein-1-injektion i en degenereret diskus inducerer genoprettelse af diskushøjde og strukturelle ændringer i kaninens anularpunkturmodel. Spine 2006; 31: 742-54. Søg i Google Scholar

7. Im HJ, Li X, Muddasani P, Kim GH, Kim GH, Davis F, Rangan J, Forsyth CB, Ellman M, Thonar EJ. Basic Fibroblast Growth Factor fremskynder matrixnedbrydning via en neuro-endokrin vej i humane voksne ledkirtelchondrocytter. J Cell Physiol 2007; 215; 452-63. Søg i Google Scholar

8. Im HJ, Muddasani P, Natarajan V, Schmid TM, Block JA, Davis F, van Wijnen AJ, Loeser RF. Basic fibroblast growth factor stimulerer matrixmetalloproteinase-13 via det molekylære krydstalk mellem de mitogen-aktiverede proteinkinaser og proteinkinase Cdelta-veje i humane voksne ledkirtelchondrocytter. J Biol Chem 2007; 282: 11110-21. Søg i Google Scholar

9. Muddasani P, Norman JC, Ellman M, van Wijnen AJ, Im HJ. Basic fibroblast growth factor aktiverer MAPK- og NFkappaB-veje, der konvergerer mod Elk-1 for at kontrollere produktionen af matrixmetalloproteinase-13 af humane voksne ledkirtelchondrocytter. J Biol Chem 2007; 282: 31409-21. Søg i Google Scholar

10. Sørensen M, Sørensen SPL. Proteinerne i valle. C R Trav Lab Carlsberg 1939; 23: 55-99. Søg i Google Scholar

11. Bennett RM, Kokocinski T. Lactoferrinindholdet i perifere blodceller. Br J Haematol 1978; 39: 509-21. Søg i Google Scholar

12. Ward PP, Paz E, Conneely OM. Multifunktionelle roller for lactoferrin: en kritisk oversigt. Cell Mol Life Sci 2005; 62: 2540-8. Søg i Google Scholar

13. Hayashida K, Kaneko T, Takeuchi T, Shimizu H, Ando K, Harada E. Oral indgift af lactoferrin hæmmer inflammation og nociception i adjuvantinduceret arthritis hos rotter. J Vet Med Sci 2004; 66: 149-54. Søg i Google Scholar

14. Guillen C, McInnes IB, Vaughan D, Speekenbrink AB, Brock JH. Virkningerne af lokal administration af lactoferrin på inflammation i murin autoimmun og infektiøs arthritis. Arthritis Rheum 2000; 43: 2073-80. Søg i Google Scholar

15. Kuwata H, Yip TT, Yip CL, Tomita M, Hutchens TW. Direkte påvisning og kvantitativ bestemmelse af bovint lactoferricin og lactoferrinfragmenter i humant maveindhold ved hjælp af affinitetsmassespektrometri. Adv Exp Med Biol 1998; 443: 23-32. Søg i Google Scholar

16. Hwang PM, Zhou N, Shan X, Arrowsmith CH, Vogel HJ. Tre-dimensionel opløsningsstruktur af lactoferricin B, et antimikrobielt peptid afledt af bovin lactoferrin. Biochemistry 1998; 37: 4288-98. Søg i Google Scholar

17. Gifford JL, Hunter HN, Hunter HN, Vogel HJ. Lactoferricin: et lactoferrin-afledt peptid med antimikrobielle, antivirale, antitumor- og immunologiske egenskaber. Cell Mol Life Sci 2005; 62: 2588-98. Søg i Google Scholar

18. Mader JS, Richardson A, Salsman J, Top D, de Antueno R, Duncan R, Hoskin DW. Bovin lactoferricin forårsager apoptose i Jurkat T-leukæmiceller ved sekventiel permeabilisering af cellemembranen og målretning af mitokondrier. Exp Cell Res 2007; 313: 2634-50. Søg i Google Scholar

19. Zhang JX, Zhang SF, Wang TD, Guo XJ, Hu RL. Ekspression i mælkekirtlen af antibakterielle peptidgener til at hæmme bakterielle patogener, der forårsager mastitis. J Dairy Sci 2007; 90: 5218-25. Søg i Google Scholar

20. Kang JH, Lee MK, Lee MK, Kim KL, Hahm KS. Struktur-biologisk aktivitetsrelation af 11-residue meget basisk peptid segment af bovin lactoferrin. Int J Pept Protein Res 1996; 48: 357-63. Søg i Google Scholar

21. Yan D, Chen D, Shen J, Xiao G, van Wijnen AJ, Im HJ. Bovin lactoferricin er antiinflammatorisk og anti-katabolisk i human ledbrusk og synovium. J Cell Physiol 2013; 228: 447-56. Søg i Google Scholar

22. van den Berg WB. Osteoarthritis year 2010 in review: patomechanismer. Osteoarthritis Cartilage 2011; 19: 338-41. Søg i Google Scholar

23. Li NG, Shi ZH, Tang YP, Wang ZJ, Song SL, Qian LH, Qian DW, Duan JA. Nyt håb for behandling af slidgigt gennem selektiv hæmning af MMP-13. Curr Med Chem 2011; 18: 977-1001. Søg i Google Scholar

24. De Rienzo F, Saxena P, Filomia F, Caselli G, Colace F, Stasi L, Giordani A, Menziani MC. Fremskridt i retning af identifikation af nye aggrecanasehæmmere. Curr Med Chem 2009; 16: 2395-415. Søg i Google Scholar

25. Mader JS, Smyth D, Marshall J, Hoskin DW. Bovine lactoferricin hæmmer basisk fibroblastvækstfaktor- og vaskulær endothelialvækstfaktor165-induceret angiogenese ved at konkurrere om heparinlignende bindingssteder på endothelceller. Am J Pathol 2006; 169: 1753-66. Søg i Google Scholar

26. Su SL, Tsai CD, Lee CH, Salter DM, Lee HS. Ekspression og regulering af Toll-like receptor 2 ved IL-1beta og fibronectinfragmenter i humane ledkirtelchondrocytter. Osteoarthritis Cartilage 2005; 13: 879-86. Søg i Google Scholar

27. Kim HA, Cho ML, Choi HY, Yoon CS, Jhun JY, Oh HJ, Kim HY. Den kataboliske vej formidlet af toll-like receptorer i humane osteoartritiske chondrocytter. Arthritis Rheum 2006; 54: 2152-63. Søg i Google Scholar

28. Yan D, Chen D, Hawse JR, van Wijnen AJ, Im HJ. Bovin lactoferricin inducerer TIMP-3 via ERK1/2-Sp1-aksen i humane ledkirtelchondrocytter. Gene 2013; 517: 12-8. Søg i Google Scholar

29. Apte SS, Olsen BR, Murphy G. Genstrukturen af tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP)-3 og dens inhiberende aktiviteter definerer den særskilte TIMP-genfamilie. J Biol Chem 1995; 270; 14313-8. Søg i Google Scholar

30. Knauper V, Will H, López-Otin C, Smith B, Atkinson SJ, Stanton H, Hembry RM, Murphy G. Cellulære mekanismer for human procollagenase-3 (MMP-13)-aktivering. Bevis for, at MT1-MMP (MMP-14) og gelatinase a (MMP-2) er i stand til at generere aktivt enzym. J Biol Chem 1996; 271: 17124-31. Søg i Google Scholar

31. Kashiwagi M, Tortorella M, Nagase H, Brew K. TIMP-3 er en potent inhibitor af aggrecanase 1 (ADAM-TS4) og aggrecanase 2 (ADAM-TS5). J Biol Chem 2001; 276: 12501-4. Søg i Google Scholar

32. Wick M, Härönen R, Mumberg D, Bürger C, Olsen BR, Budarf ML, Apte SS, Müller R. Struktur af det menneskelige TIMP-3-gen og dets cellecyklusregulerede promotor. Biochem J 1995; 311: 549-54. Søg i Google Scholar

33. Qureshi HY, Sylvester J, El Mabrouk M, Zafarullah M. TGF-beta-induceret ekspression af tissue inhibitor of metalloproteinases-3-genet i chondrocytter medieres af ekstracellulær signalreguleret kinasevej og Sp1-transskriptionsfaktoren. J Cell Physiol 2005; 203: 345-52. Søg i Google Scholar

34. Kim JS, Ellman MB, An HS, Yan D, van Wijnen AJ, Murphy G, Hoskin DW, Im HJ. Lactoferricin formidler anabolske og anti-kataboliske virkninger i den intervertebrale diskus. J Cell Physiol 2012; 227: 1512-20. Søg i Google Scholar

35. Sekiya I, Tsuji K, Koopman P, Watanabe H, Yamada Y, Shinomiya K, Nifuji A, Noda M. SOX-9 øger aggrecan-genets promotor/enhanceraktivitet og opreguleres af retinoinsyre i en bruskafledt cellelinje, TC6. J Biol Chem 2000; 275: 10738-44. Søg i Google Scholar

36. Zhang Y, An HS, Thonar EJ, Chubinskaya S, He TC, Phillips FM. Sammenlignende virkninger af knoglemorfogenetiske proteiner og SOX-9-overekspression på ekstracellulær matrixmetabolisme af bovine nucleus pulposus-celler. Spine (Phila Pa 1976) 2006; 31: 2173-9. Søg i Google Scholar

37. Ellman MB, Kim J, An HS, Chen D, Kc R, Li X, Xiao G, Yan D, Suh J, van Wjnen AJ, Wang JH, Kim SG, Im HJ. Lactoferricin forbedrer BMP7-stimulerede anabole veje i intervertebrale diskusceller. Gene 2013; 524: 282-91. Søg i Google Scholar

38. Flechtenmacher J, Huch K, Thonar EJ, Mollenhauer JA, Davies SR, Schmid TM, Puhl W, Sampath TK, Aydelotte MB, Kuettner KE. Rekombinant humant osteogent protein 1 er en potent stimulator af syntesen af bruskproteoglykaner og kollagener fra humane ledkapselchondrocytter. Arthritis Rheum 1996; 39: 1896-904. Søg i Google Scholar

39. Sampath TK, Maliakal JC, Hauschka PV, Jones WK, Sasak H, Tucker RF, White KH, Coughlin JE, Tucker MM, Pang RH. Rekombinant humant osteogent protein-1 (hOP-1) inducerer ny knogledannelse in vivo med en specifik aktivitet, der kan sammenlignes med naturligt bovint osteogent protein, og stimulerer osteoblastproliferation og -differentiering in vitro. J Biol Chem 1992; 267: 20352-62. Søg i Google Scholar

40. Kim JS, Ellman MB, Yan D, An HS, Kc R, Li X, Chen D, Xiao G, Cs-Zabo G, Hoskin DW, Buechter DD, van Wijnen AJ, Im HJ. Lactoferricin formidler antiinflammatoriske og antikataboliske virkninger via hæmning af IL-1- og LPS-aktivitet i den intervertebrale diskus. J Cell Physiol 2013; 228: 1884-96. Søg i Google Scholar

41. Millward-Sadler SJ, Costello PW, Freemont AJ, Hoyland JA. Regulering af katabolisk genekspression i normale og degenererede menneskelige intervertebrale diskceller: implikationer for patogenesen af intervertebral diskdegeneration. Arthritis Res Ther 2009; 11: R65. Søg i Google Scholar

42. Liu MH, Sun JS, Tsai SW, Sheu SY, Chen MH. Icariin beskytter murine chondrocytter mod lipopolysaccharid-inducerede inflammatoriske reaktioner og nedbrydning af ekstracellulær matrix. Nutr Res 2010; 30: 57-65. Søg i Google Scholar

43. Campo GM, Avenoso A, Nastasi G, Micali A, Prestipino V, Vaccaro M, D’Ascola A, Calatroni A, Campo S. Hyaluronan reducerer inflammation i eksperimentel arthritis ved at modulere TLR-2 og TLR-4 bruskekspression. Biochim Biophys Acta 2011; 1812: 1170-81. Søg i Google Scholar