Et kromatogram er i det væsentlige resultatet af en kromatografikørsel. Det er en elektronisk fil eller et papirudskrift, der indeholder de oplysninger, der er genereret under kromatografikørslen.
Der er mange forskellige variationer af, hvad der vises på et kromatogram – afhængigt af de indstillinger, der anvendes i det enkelte laboratorium, og eventuelle lovkrav. Som et eksempel kan det minimum, der vises på en GC-kørsel af en prøve under proces, være:
- Probeidentifikation (produkt, batchnummer, trinnummer)
- Probeoplysninger (prøvens vægt eller koncentration)
- Dato og klokkeslæt for injektionen
- Analysepersonens navn eller identifikation
- Instrumentidentifikation og navnet på den anvendte analysemetode
- Filnavn og placering af de rådata, der genereres under kørslen
- Kortoptagelse, der viser de genererede toppe og basislinjen, kendt som en trace
- Resultattabel (indeholder rådata og beregnede data)
I dag er det i høj grad en automatiseret proces at generere en resultattabel, men det har ikke altid været så enkelt…
Kvadratpapir og saks
Hvor dataanalyse og digital integration blev standard – var millimeterpapir og saks at finde på enhver analytikers hylde.
En diagramoptager, der var forbundet med detektoren, registrerede sporet direkte på kvadratpapir eller millimeterpapir ved hjælp af en blækpen. Ud fra sporet var der to metoder, der almindeligvis blev anvendt til at udregne resultaterne:
Tælling af kvadrater:
Analytikeren brugte en lineal og en pen til at tegne den bedste topform (trekant) og basislinje. Antallet af firkanter i hver trekant blev derefter talt. Denne tælling blev derefter anvendt sammen med detektorens dæmpning, og prøvens sammensætning blev beregnet.
Skæring og vejning:
Der blev konstrueret en basislinje for de registrerede toppe. Toppene blev derefter skåret ud og vejet. Peakarealet er proportionalt med vægten, forudsat at papirets tykkelse og fugtindhold er ensartet. Tricks som fotokopiering af sporet og forstørrelse af sporet kunne bruges til at øge præcisionen.
Som det kan afbildes, kan overlappende toppe og prøver, der indeholder mange forskellige bestanddele, volde en analytiker alvorlige problemer. Nu hjælper computere med at reducere fejlene.
Læsning af et kromatogram
Selv om moderne instrumenter har fjernet meget af gætteriet fra papir og saks-dagene, er evnen til at læse og fortolke et kromatogram lige så vigtig i dag.
Sporet bør altid kontrolleres, da det vil være den første indikation, hvis der er gået noget galt med kromatografien. Simple kontroller omfatter:
- Ser basislinjen OK ud, flad med ikke for meget støj?
- Er formen på toppene acceptabel? Ikke for meget asymmetri, pæn og skarp og i overensstemmelse med skalaen
- Er der det rigtige antal toppe? Er der ekstra eller manglende toppe?
- Er reference- og interne standardtoppene korrekt identificeret, og er retentionstiderne OK?
Selv om alle dataene er registreret og beregningerne foretaget for analytikeren, er det analytikerens opgave at sikre, at der ikke er begået fejl. En diskussion om dataanalyse i moderne systemer findes i denne artikel: Automatiseret analyse af metrikker fra Open-Access HPLC-instrumentering.