Na-strøm i membranpletter: implikationer for kanalmobilitet og patch clamp-optagelse

Når der blev suget på løse patch clamp-pipetter under optagelse fra enzymatisk dissocierede muskelfibre, blev der dannet store membranpletter i pipetterne. Vi indledte en undersøgelse af disse sugeinducerede blebs, fordi ionkanaler i blebs ville komplicere eller muligvis ugyldiggøre løse patch-spændingsklemme-målinger af membranstrømtæthed. Den lave laterale mobilitet (Stühmer og Almers, 1982) og de stejle gradienter af Na-kanaler ved endepladen og senen (Caldwell et al., 1986) indebærer en tæt binding af Na-kanaler til cytoskeletale elementer og fik os til at forvente få, om nogen, Na-kanaler i blebsene. Bleb-dannelsen gav en stigning i membrankapacitansen, som forventet ud fra stigningen i membranarealet. Bleb-dannelsen øgede også Na-strømmen, hvilket indikerer, at blebsene indeholdt Na-kanaler. Hvis man antager, at den øgede kapacitans og Na-strømmen skyldtes lipid og Na-kanaler, der flyttede sig fra membranen uden for pipetten, forventedes det, at udstødning af bleb’en fra pipetten ville bringe kapacitansen og Na-strømmen tilbage til deres oprindelige værdier. Kapacitansen vendte tilbage til sin oprindelige værdi, men Na-strømmen var lavere end forventet. Faldet i Na-strømmen kan forklares ved, at Na-kanalerne bevæger sig fra patchmembranen ind i blæren. Normalisering af Na-strømmen fra bleb og patch til deres respektive kapacitanser viste, at bleb-membranen havde en Na-kanaltæthed på næsten 50 % af den normale overflademembran. Således er blebmembranen hverken blottet for proteiner eller virkelig repræsentativ for den normale overflademembran, hvorfra den er opstået. Den er beriget med membranlipider og er relativt fattig på proteiner. Der kan drages to konklusioner (AFSNIT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Skriv en kommentar