Oprensning af IgG ved hjælp af DEAE-sepharose-kromatografi

Abstract

IgG kan oprenses fra serum ved hjælp af en enkel et-trins ionbytningskromatografi-procedure. Metoden er meget udbredt og fungerer ud fra det princip, at IgG har et højere eller mere basisk isoelektrisk punkt end de fleste serumproteiner. Hvis pH-værdien holdes under det isoelektriske punkt for de fleste antistoffer, bindes immunoglobulinerne derfor ikke til en anionbytter og adskilles fra størstedelen af de serumproteiner, der er bundet til kolonnematrixen. Anionbytningskolonnernes høje kapacitet gør det muligt at foretage rensning af IgG fra serum i stor skala. Den anionbyttende reaktive gruppe diethylaminoethyl (DEAE), der er kovalent knyttet til Sepharose (f.eks. DEAE Sepharose CL-6B, Pharmacia, Uppsala, Sverige), er nyttig til dette formål. Den leveres forvokset og klar til pakning i en kolonne, og den er robust og har en høj bindingskapacitet. Desuden er den relativt stabil over for ændringer i ionstyrke og pH-værdi. Andre matricer (f.eks. DEAE-cellulose) leveres som faste stoffer og kræver derfor forberedelse og equilibrering (1).

Skriv en kommentar