สารบัญ

Kategorie Beta-Lactamase-Hemmer.

Clavulanat-Kalium enthält das Äquivalent von nicht weniger als 75,5 Prozent und nicht mehr als 92,0 Prozent C8H9NO5, berechnet auf der Basis der Trockenmasse.

Verpackung und Lagerung Clavulanat-Kalium ist in dicht verschlossenen Behältern aufzubewahren und bei einer Temperatur zwischen 2º und 8º zu lagern.

Kennzeichnung Das Etikett auf dem Behältnis gibt an: (1) Lagerungsbedingungen; (2) parenterale oder nicht-parenterale Qualität.

Kennzeichnung
A. Das Chromatogramm der Assay-Zubereitung, die gemäß den Anweisungen des Assays erhalten wurde, zeigt einen Hauptpeak für Clavulansäure, dessen Retentionszeit mit der im Chromatogramm der Standardzubereitung übereinstimmt, die gemäß den Anweisungen des Assays erhalten wurde.
B. Es führt zu den für Kaliumsalze charakteristischen Reaktionen (Anhang 5.1).

pH 5,5 bis 8,0, in einer 1,0-prozentigen w/v-Lösung (Anhang 4.11).

Wasser Nicht mehr als 1,5 Gewichtsprozent (Karl-Fischer-Methode, Anhang 4.12).

Grenzwert für Clavam-2-Carboxylat-Kalium Nicht mehr als 0,01 Prozent. Die Bestimmung wird wie in der „Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie“ (Anhang 3.5) beschrieben durchgeführt.
Mobile Phase 0,1 M Natriumdihydrogenphosphat vorbereiten, mit Phosphorsäure auf einen pH-Wert von 4,0±0,1 einstellen und durch einen Membranfilter von 0,5 μm oder feinerer Porosität filtrieren. Falls erforderlich, Anpassungen vornehmen. Standardlösung Clavam-2-Carboxylat-Kalium RS in Wasser auflösen, um eine Lösung mit einer bekannten Konzentration von etwa 40 μg pro ml zu erhalten.
Prüflösung Etwa 100 mg Clavulanat-Kalium, genau abgewogen, in einen 10-ml-Messkolben geben, in Wasser auflösen, mit Wasser auf das Volumen verdünnen und mischen.
Auflösungslösung Lösen Sie eine geeignete Menge Clavulanat-Kalium in der Standardlösung auf, um eine Lösung zu erhalten, die etwa 1 mg Clavulanat-Kalium und 30 μg Clavam-2-Carboxylat-Kalium pro ml enthält.
Chromatografisches System Das chromatografische Verfahren kann durchgeführt werden unter Verwendung (a) einer Edelstahlsäule (30 cm × 4 mm), die mit Octadecylsilan gepackt ist, das chemisch an poröse Siliziumdioxid- oder Keramikmikropartikel (3 bis 10 μm) gebunden ist, (b) einer mobilen Phase mit einer Durchflussrate von 0,5 ml pro Minute und (c) eines auf 210 nm eingestellten Ultraviolettphotometers.
Um die Eignung des chromatographischen Systems zu bestimmen, wird die Standardlösung chromatographiert und die Peak-Reaktionen gemäß den Anweisungen unter „Verfahren“ aufgezeichnet: Der Symmetriefaktor beträgt höchstens 1,5 und die relative Standardabweichung für Wiederholungsinjektionen beträgt höchstens 2,0 %. Chromatographieren Sie die Auflösungslösung und zeichnen Sie die Peakreaktionen wie unter Verfahren beschrieben auf: Der Auflösungsfaktor zwischen den Clavam-2-Carbonsäure- und Clavulansäure-Peaks ist nicht kleiner als 1,0.
Verfahren Spritzen Sie getrennt gleiche Volumina (etwa 20 μl) der Standardlösung und der Testlösung in den Chromatographen, nehmen Sie die Chromatogramme auf und messen Sie die Reaktionen für die Hauptpeaks. Die relativen Retentionszeiten betragen etwa 0,7 für Clavam-2-Carbonsäure und 1,0 für Clavulansäure. Berechnen Sie den prozentualen Anteil von Clavam-2-Carboxylat-Kalium

Grenzwert von Methanol und tert-Butylamin Nicht mehr als 0,1 Gewichtsprozent Methanol oder nicht mehr als 0,2 Gewichtsprozent tert-Butylamin. Die Bestimmung wird wie in „Gaschromatographie“ (Anhang 3.4) beschrieben durchgeführt.
Standardlösung Zu einem 100-ml-Messkolben, der 50,0 ml 3 M Natriumhydroxid enthält, werden etwa 6 ml Methanol und 12 ml tert-Butylamin, beide genau abgewogen, mit 3 M Natriumhydroxid auf
Volumen verdünnt und gemischt. 10,0 ml dieser Stammlösung werden in einen zweiten 100-ml-Messkolben überführt, mit 3 M Natriumhydroxid bis zur Marke verdünnt und gemischt. 10,0 ml dieser Lösung in einen dritten 100-ml-Messkolben überführen, mit 3 M Natriumhydroxid bis zur Marke verdünnen und mischen. 7,0 ml dieser Lösung in einen vierten 100-ml-Messkolben überführen, 3,0 ml 3-M-Natriumhydroxid hinzufügen, mit 4-Methyl-2-pentanon bis zur Marke verdünnen und mischen. Die Phasen werden getrennt und die klare Methylisobutylketonschicht als Standardlösung verwendet. Diese Lösung enthält etwa 36,6 μg Methanol und 63,8 μg tert-Butylamin pro ml. Verwenden Sie diese Lösung innerhalb von 5 Stunden.
Testlösung Geben Sie etwa 3 g Clavulanat-Kalium, genau abgewogen, in einen 100-ml-Messkolben, fügen Sie 10,0 ml 3 M Natriumhydroxid hinzu und schütteln Sie, bis es gelöst ist. Man lässt im kalten Wasserbad abkühlen, verdünnt mit 4-Methyl-2-Pentanon bis zur Marke, verschließt den Kolben und schüttelt 3 Minuten lang kräftig, wobei gelegentlich gelüftet wird. Man lässt die Phasen auseinanderlaufen und verwendet die klare Methylisobutylketonschicht als Testlösung. Diese Lösung ist innerhalb von 5 Stunden zu verwenden.
Chromatographisches System Das chromatographische Verfahren kann durchgeführt werden mit (a) einer Glassäule (30 m × 0,32 mm), die mit einer stationären Dimethylpolysiloxan-Ölphase beschichtet ist und auf 40 ºC gehalten wird, dann mit einer Geschwindigkeit von 55 ºC pro Minute auf 200 ºC ansteigt und 4 Minuten lang auf dieser Temperatur gehalten wird, (b) der Injektionsöffnung und dem Detektorblock, die auf 150 ºC gehalten werden, (c) Stickstoff als Trägergas und (d) einem Flammenionisationsdetektor. Um die Eignung des chromatographischen Systems zu bestimmen, wird die Standardlösung chromatographiert und die Peakreaktionen von Methanol, tert.-Butylamin und Methylisobutylketon gemäß den Anweisungen für das Verfahren aufgezeichnet: Der Symmetriefaktor ist nicht größer als 1.6 für die Methanol- und tert-Butylamin-Peaks; die Säuleneffizienz ist nicht kleiner als 25.000 theoretische Platten; der Auflösungsfaktor zwischen dem Methanol-Peak und dem tert-Butylamin-Peak ist nicht kleiner als 20 und zwischen dem tert-Butylamin-Peak und dem 4-Methyl-2-Pentanon-Peak ist nicht kleiner als 10; und die relative Standardabweichung für Wiederholungsinjektionen ist nicht größer als 10 Prozent.

Vorgehensweise Gleiche Volumina (ca. 1 μl) der Standardlösung und der Testlösung werden getrennt in den Chromatographen eingespritzt, die Chromatogramme aufgenommen und die Flächen der Reaktionen der Methanol- und tert-Butylamin-Peaks gemessen.
Berechnung Berechnen Sie den prozentualen Anteil des Methanols und des tert-Butylamins im Clavulanat-Kalium.
Chromatographische Reinheit Führen Sie die Bestimmung durch, wie in der „Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie“ beschrieben (Anhang 3.5).
Lösung A Bereiten Sie eine Lösung von 0,05 M Natriumdihydrogenphosphat vor, stellen Sie mit Phosphorsäure einen pH-Wert von 4,0±0,1 ein und filtrieren Sie durch ein Filter mit einer Porosität von 0,5-μm oder feiner.
Lösung B Bereiten Sie ein Gemisch aus gleichen Volumina von Lösung A und Methanol vor.
Mobile Phase Verwenden Sie variable Mischungen von Lösung A und Lösung B gemäß den Anweisungen für das chromatographische System. Nehmen Sie nach Bedarf Anpassungen an einer der beiden Lösungen vor.
Standardlösung Bereiten Sie eine Lösung von Clavulanat Lithium RS in Lösung A mit einer bekannten Konzentration von etwa 0,1 mg pro ml vor.
Testlösung Bereiten Sie eine Lösung von Clavulanat Kalium in Lösung A mit 10.0 mg pro ml.
Auflösungslösung Man stellt eine Lösung von Clavulanat-Lithium RS und Amoxicillin in Lösung A her, die jeweils 0,1 mg pro ml enthält.
Chromatographisches System Das chromatographische Verfahren kann unter Verwendung (a) einer Edelstahlsäule (10 cm × 4.6 mm), die mit Octadecylsilan gepackt ist, das chemisch an poröse Siliciumdioxid- oder Keramikmikropartikel (3 bis 10 μm) gebunden ist, und die bei einer konstanten Temperatur von etwa 40 ºC gehalten wird, (b) eine mobile Phase mit einer Flussrate von etwa 1 ml pro Minute und (c) ein auf 230 nm eingestelltes Ultraviolettphotometer.
Das System ist so programmiert, dass es eine mobile Phase bereitstellt, die aus variablen Mischungen von Lösung A und Lösung B besteht. Das System wird 15 Minuten lang mit 100 % Lösung A äquilibriert und nach der Injektion der zu prüfenden Lösung 4 Minuten lang bei dieser Zusammensetzung gehalten, wonach der Anteil der Lösung B über einen Zeitraum von 11 Minuten linear von 0 auf 50 % erhöht wird. Das System wird 3 Minuten lang in dieser Zusammensetzung gehalten und dann 6 Minuten lang auf 100 % Lösung A umgestellt. Um die Eignung des chromatographischen Systems zu bestimmen, wird die Auflösungslösung chromatographiert und die Peakreaktionen gemäß den Anweisungen für das Verfahren aufgezeichnet: Die relativen Retentionszeiten betragen etwa 2,5 für Amoxicillin und 1,0 für Clavulansäure; der Symmetriefaktor für den Clavulansäure-Peak beträgt nicht mehr als 2,0; die anhand des Clavulansäure-Peaks ermittelte Säuleneffizienz liegt nicht unter 2000 theoretischen Platten; und der Auflösungsfaktor zwischen dem Clavulansäure-Peak und dem Amoxicillin-Peak beträgt nicht weniger als 13. Chromatographieren Sie die Standardlösung und zeichnen Sie die Peakreaktionen wie unter Verfahren beschrieben auf: die relative Standardabweichung für Wiederholungsinjektionen beträgt nicht mehr als 2 %.
Verfahren Spritzen Sie getrennt gleiche Volumina (etwa 20 μl) der Standardlösung und der Testlösung in den Chromatographen, zeichnen Sie die Chromatogramme auf und messen Sie die Peakreaktionen.
Berechnung Berechnen Sie den prozentualen Anteil der einzelnen Verunreinigungen im Clavulanat-Kalium-Äquivalent nach folgender Formel:

10(237.3/205.1)(C)(ri/rS),

wobei 237.3 das Molekulargewicht von Clavulanat-Kalium ist; 205.1 das Molekulargewicht von Clavulanat-Lithium ist; C die Konzentration von Clavulanat-Kalium RS in der Standardlösung in mg/ml ist; ri die Peakreaktion eines einzelnen Verunreinigungspeaks im Chromatogramm aus der Testlösung ist; und rS die Clavulansäure-Peakreaktion im Chromatogramm aus der Standardlösung ist. Die Summe aller Verunreinigungspeaks beträgt nicht mehr als 2 %.

Assay Die Bestimmung wird wie in der „Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie“ (Anhang 3.5) beschrieben durchgeführt.
pH 4,4 Natriumphosphatpuffer Lösen Sie 7.8 g Natriumdihydrogenphosphat in 900 ml Wasser, mit Phosphorsäure oder 10 M Natriumhydroxid auf einen pH-Wert von 4,4±0,1 einstellen, mit Wasser auf 1000 ml verdünnen und mischen.
Mobile Phase Eine geeignete Mischung aus 95 Volumina Natriumphosphatpuffer pH 4,4 und 5 Volumina Methanol herstellen. Falls erforderlich, Anpassungen vornehmen.
Standardvorbereitung Eine genau abgewogene Menge Clavulanat Lithium RS in Wasser auflösen, um eine Lösung mit einer bekannten Konzentration von etwa 250 μg pro ml zu erhalten.
Testvorbereitung Etwa 50 mg Clavulanat-Kalium, genau eingewogen, in einen 200-ml-Messkolben geben, in Wasser auflösen, mit Wasser auf das Volumen verdünnen und mischen.
Auflösungslösung Eine geeignete Menge Amoxicillin in der Standardvorbereitung auflösen, um eine Lösung zu erhalten, die etwa 0,5 mg Amoxicillin und 250 μg Clavulanat-Lithium pro ml enthält.
Chromatographisches System Das chromatographische Verfahren kann durchgeführt werden unter Verwendung (a) einer Edelstahlsäule (30 cm × 4 mm), die mit Octadecylsilan gepackt ist, das chemisch an poröse Siliciumdioxid- oder Keramikmikropartikel (3 bis 10 μm) gebunden ist, (b) einer mobilen Phase mit einer Durchflussrate von etwa 2 ml pro Minute und (c) eines auf 220 nm eingestellten Ultraviolettphotometers.
Um die Eignung des chromatographischen Systems zu bestimmen, wird die Auflösungslösung chromatographiert und die Peak-Reaktionen wie unter Verfahren beschrieben aufgezeichnet: Der Auflösungsfaktor zwischen den Amoxicillin- und Clavulansäure-Peaks beträgt mindestens 3,5 und die relativen Retentionszeiten liegen bei etwa 0,5 für Clavulansäure und 1,0 für Amoxicillin. Chromatographieren des Standardansatzes und Aufzeichnen der Peakreaktionen wie unter Verfahren angegeben: der Symmetriefaktor für den Clavulansäurepeak beträgt höchstens 1,5 und die relative Standardabweichung für Wiederholungsinjektionen beträgt höchstens 2,0 %.
Vorgehensweise Gleiche Volumina (ca. 20 μl) der Standardzubereitung und der Testzubereitung getrennt in den Chromatographen injizieren, die Chromatogramme aufzeichnen und die Reaktionen für die Hauptpeaks messen.
Berechnung Berechnen Sie den Gehalt an C8H9NO5 im entnommenen Clavulanat-Kalium unter Verwendung des angegebenen Gehalts an C8H9NO5 in Clavulanat-Lithium RS.