Die Met-Mutanten sind Met-Auxotrophe, d.h. sie können nicht in Medien wachsen, die kein Met enthalten. Auxotrophe sind Mikroorganismen, die aufgrund einer Genmutation nicht in der Lage sind, einen essenziellen Nährstoff zu synthetisieren. Viele Laborstämme tragen mehrere Mutationen, die die Synthese essenzieller Nährstoffe beeinträchtigen. Da der Stamm BY4742 beispielsweise Mutationen in den Genen HIS3, LEU2, LYS2 und URA3 trägt, wächst er nur in Medien, die Histidin, Leucin, Lysin und Uracil enthalten. Auxotrophe Stämme werden in der Genetik vielfältig eingesetzt. Forscher verwenden auxotrophe Stämme häufig als Wirte für die Plasmidtransformation (Kapitel 12). Die Plasmide, die für die Transformation verwendet werden, tragen funktionelle Allele eines Gens, das im Wirtsstamm defekt ist, so dass es möglich ist, Transformanten nach ihrer Fähigkeit zu selektieren, auf Medien zu wachsen, denen der essenzielle Nährstoff fehlt.
Synthetische Medien sind ein wesentliches Werkzeug für die Kultivierung und Untersuchung auxotropher Organismen, da alle Komponenten definiert sind. Hefeforscher haben eine Vielzahl von verschiedenen Formulierungen für synthetische Medien entwickelt. Alle synthetischen Medien enthalten eine Kohlenstoffquelle (in der Regel D-Glucose), eine Stickstoffquelle sowie wichtige Vitamine und Mineralien. Die Vitamine und Mineralien werden in der Regel als Hefe-Stickstoff-Basis (YNB) zugekauft
. Die den synthetischen Medien hinzugefügten Zusätze können maßgeschneidert werden, um das Wachstum bestimmter Genotypen zu fördern oder zu verhindern. In diesem Kurs werden wir Yeast Complete (YC) Medium verwenden, das das Wachstum der meisten S. cerevisia-Stämme unterstützt. Die Wachstumsrate von Wildtyp-Stämmen in YC ist etwas langsamer als in reichhaltigen Medien wie YPD, aber die Stämme sind über lange Zeiträume lebensfähig. Die Tabelle auf der folgenden Seite zeigt die Zusammensetzung von YC, das ein reiches Angebot an Aminosäuren und Nukleotidbasen enthält. Neben dem vollständigen YC-Medium werden wir auch Selektivmedien verwenden, bei denen einige Komponenten weggelassen wurden. In diesem Labor werden wir zum Beispiel YC-Met-Medien verwenden, die alle in der folgenden Tabelle aufgeführten YC-Komponenten außer Methionin enthalten.
