Ein Chromatogramm ist im Wesentlichen das Ergebnis eines Chromatographielaufs. Es ist eine elektronische Datei oder ein Ausdruck, der die während des Chromatographielaufs erzeugten Informationen enthält.
Es gibt viele verschiedene Variationen dessen, was auf einem Chromatogramm angezeigt wird – je nach den in jedem Labor verwendeten Einstellungen und den gesetzlichen Anforderungen. Als Beispiel könnte das Minimum, das auf einem GC-Lauf einer In-Process-Probe angezeigt wird, sein:
- Probenidentifikation (Produkt, Chargennummer, Probennummer)
- Probeninformationen (Gewicht oder Konzentration der Probe)
- Datum und Uhrzeit der Injektion
- Name oder Kennung des Analytikers
- Gerätekennung und Name der verwendeten Analysemethode
- Dateiname und Speicherort der während des Laufs erzeugten Rohdaten
- Datenaufzeichnung mit Angabe der erzeugten Peaks und der Basislinie,
- Ergebnistabelle (mit Rohdaten und berechneten Daten)
Heutzutage ist die Erstellung einer Ergebnistabelle weitgehend automatisiert, aber das war nicht immer so einfach.
Quadratisches Papier und Schere
Bevor die Datenanalyse und die digitale Integration zum Standard wurden, waren Millimeterpapier und Schere im Regal eines jeden Analytikers zu finden.
Ein mit dem Detektor verbundener Schreiber zeichnete die Spur mit einem Tintenstift direkt auf quadratisches Papier oder Millimeterpapier auf. Aus der Messkurve wurden die Ergebnisse auf zwei Arten ermittelt:
Quadrate zählen:
Der Analytiker zeichnete mit Lineal und Stift die beste Peakform (Dreieck) und die Grundlinie ein. Die Anzahl der Quadrate in jedem Dreieck wurde dann gezählt. Diese Anzahl wurde dann zusammen mit der Dämpfung des Detektors verwendet und die Zusammensetzung der Probe berechnet.
Ausschneiden und Wiegen:
Eine Basislinie wurde für die aufgezeichneten Peaks erstellt. Die Peaks wurden dann ausgeschnitten und gewogen. Die Peakfläche ist proportional zum Gewicht, vorausgesetzt, die Dicke und der Feuchtigkeitsgehalt des Papiers sind gleichmäßig. Mit Tricks wie dem Fotokopieren der Spur und dem Vergrößern der Spur konnte die Genauigkeit erhöht werden.
Wie man sich vorstellen kann, können sich überlappende Peaks und Proben mit vielen verschiedenen Bestandteilen dem Analytiker ernsthafte Probleme bereiten. Heute helfen Computer dabei, die Fehler zu reduzieren.
Lesen eines Chromatogramms
Obwohl moderne Geräte einen Großteil des Rätselraten aus der Zeit von Papier und Schere beseitigt haben, ist die Fähigkeit, ein Chromatogramm zu lesen und zu interpretieren, heutzutage genauso wichtig.
Die Spur sollte immer überprüft werden, da dies der erste Hinweis darauf ist, ob etwas mit der Chromatographie schief gelaufen ist. Einfache Überprüfungen sind:
- Sieht die Basislinie gut aus, flach mit nicht zu viel Rauschen?
- Sind die Formen der Peaks akzeptabel? Nicht zu asymmetrisch, schön scharf und maßstabsgerecht
- Ist die Anzahl der Peaks richtig? Gibt es zusätzliche oder fehlende Peaks?
- Sind die Peaks der Referenz und des internen Standards korrekt identifiziert und sind die Retentionszeiten in Ordnung?
Auch wenn alle Daten aufgezeichnet und Berechnungen für den Analytiker durchgeführt werden, ist es seine Aufgabe, sicherzustellen, dass keine Fehler gemacht wurden. Eine Diskussion über die Datenanalyse in modernen Systemen findet sich in diesem Artikel: Automatisierte Analyse von Metriken offen zugänglicher HPLC-Instrumente.