Categoría Inhibidor de betalactamasas.
Clavulanato Potásico contiene el equivalente de no menos del 75,5 por ciento y no más del 92,0 por ciento de C8H9NO5, calculado en base anhidra.
Envase y almacenamiento El Clavulanato Potásico se mantendrá en envases bien cerrados y se almacenará a una temperatura entre 2º y 8º.
Etiquetado La etiqueta del envase indica (1) condición de almacenamiento; (2) grado parenteral o no parenteral.
Identificación
A. El cromatograma de la preparación de ensayo obtenida como se indica en el ensayo presenta un pico principal para el ácido clavulánico, cuyo tiempo de retención corresponde al exhibido en el cromatograma de la preparación estándar obtenida como se indica en el ensayo.
B. Produce las reacciones características de las sales de potasio (Apéndice 5.1).
PH 5,5 a 8,0, en una solución al 1,0 por ciento p/v (Apéndice 4.11).
Agua No más del 1,5 por ciento p/p (Método de Karl Fischer, Apéndice 4.12).
Límite de clavam-2-carboxilato potásico No más del 0,01 por ciento. Realizar la determinación como se describe en la «Cromatografía líquida de alta presión» (Apéndice 3.5).
Fase móvil Preparar dihidrogenofosfato de sodio 0,1 M, ajustar con ácido fosfórico a un pH de 4,0±0,1 y filtrar a través de un filtro de membrana de 0,5 μm o de porosidad más fina. Hacer ajustes si es necesario. Solución estándar Disolver Clavam-2-Carboxilato Potásico RS en agua para obtener una solución que tenga una concentración conocida de unos 40 μg por ml.
Solución de prueba Transferir unos 100 mg de Clavulanato Potásico, pesados con precisión, a un matraz aforado de 10 ml, disolver en y diluir con agua hasta el volumen, y mezclar.
Solución de resolución Disolver una cantidad adecuada de clavulanato de potasio en la solución estándar para obtener una solución que contenga aproximadamente 1 mg de clavulanato de potasio y 30 μg de clavam-2-carboxilato de potasio por ml.
Sistema cromatográfico El procedimiento cromatográfico puede llevarse a cabo utilizando (a) una columna de acero inoxidable (30 cm × 4 mm) empaquetada con octadecilsilano unido químicamente a sílice porosa o micropartículas de cerámica (3 a 10 μm) (b) fase móvil a un caudal de 0,5 ml por minuto, y (c) un fotómetro ultravioleta ajustado a 210 nm.
Para determinar la idoneidad del sistema cromatográfico, cromatografíe la solución estándar y registre las respuestas de los picos como se indica en el apartado Procedimiento: el factor de simetría no es superior a 1,5 y la desviación estándar relativa de las inyecciones repetidas no es superior al 2,0%. Cromatografíe la solución de resolución y registre las respuestas de los picos como se indica en Procedimiento: el factor de resolución entre los picos del ácido clavam-2-carboxílico y del ácido clavulánico no es inferior a 1,0.
Procedimiento Inyecte por separado volúmenes iguales (unos 20 μl) de solución estándar y de solución de prueba en el cromatógrafo, registre los cromatogramas y mida las respuestas de los picos principales. Los tiempos de retención relativos son aproximadamente 0,7 para el ácido clavam-2-carboxílico y 1,0 para el ácido clavulánico. Calcular el porcentaje de clavam-2-carboxilato de potasio
Límite de metanol y tert-butilamina No más del 0,1 por ciento p/p de metanol ni más del 0,2 por ciento p/p de tert-butilamina. Realizar la determinación como se describe en la «Cromatografía de gases» (Apéndice 3.4).
Solución patrón A un matraz aforado de 100 ml que contenga 50,0 ml de hidróxido sódico 3 M añadir unos 6 ml de metanol y 12 ml de terc-butilamina, ambos pesados con precisión, diluir con hidróxido sódico 3 M hasta
el volumen y mezclar. Transferir 10,0 ml de esta solución madre a un segundo matraz aforado de 100 ml, diluir con hidróxido sódico 3 M hasta volumen y mezclar. Transfiera 10,0 ml de esta solución a un tercer matraz aforado de 100 ml, diluya con hidróxido de sodio 3 M hasta el volumen y mezcle. Transferir 7,0 ml de esta solución a un cuarto matraz aforado de 100 ml, añadir 3,0 ml de hidróxido sódico 3 M, diluir con 4-metil-2-pentanona hasta volumen y mezclar. Dejar que las fases se separen y utilizar la capa transparente de metil isobutil cetona como solución patrón. Esta solución contiene aproximadamente 36,6 μg de metanol y 63,8 μg de tertbutilamina por ml. Utilice esta solución antes de 5 horas.
Solución de prueba Transfiera unos 3 g de Clavulanato Potásico, pesados con precisión, a un matraz aforado de 100 ml, añada 10,0 ml de hidróxido de sodio 3 M y agite hasta que se disuelva. Dejar enfriar en un baño de agua fría, diluir con 4-metil-2-pentanona hasta el volumen, tapar el matraz y agitar enérgicamente durante 3 minutos, ventilando de vez en cuando. Dejar que las fases se separen y utilizar la capa transparente de metil isobutil cetona como solución de prueba. Utilizar esta solución en un plazo de 5 horas.
Sistema cromatográfico El procedimiento cromatográfico puede llevarse a cabo utilizando (a) una columna de vidrio (30 m × 0,32 mm) recubierta con fase estacionaria de aceite de dimetilpolisiloxano y se mantiene a 40º, luego se programa para que aumente a una velocidad de 55º por minuto hasta 200º, y se mantiene a esa temperatura durante 4 minutos, (b) el puerto de inyección y el bloque detector se mantienen a 150º, (c) nitrógeno como gas portador, y (d) un detector de ionización de llama. Para determinar la idoneidad del sistema cromatográfico, se cromatografía la solución estándar y se registran las respuestas de los picos de metanol, tert-butilamina y metil isobutil cetona como se indica en el procedimiento: el factor de simetría no es superior a 16 para los picos de metanol y tert-butilamina; la eficacia de la columna no es inferior a 25.000 platos teóricos; el factor de resolución entre el pico de metanol y el pico de tert-butilamina no es inferior a 20 y entre el pico de tert-butilamina y el pico de 4-metil-2-pentanona no es inferior a 10; y la desviación estándar relativa para las inyecciones repetidas no es superior al 10 por ciento.
Procedimiento Inyectar por separado volúmenes iguales (aproximadamente 1 μl) de solución estándar y de solución de prueba en el cromatógrafo, registrar los cromatogramas y medir las áreas de las respuestas de los picos de metanol y de tert-butilamina.
Cálculo Calcular los porcentajes de metanol y de tert-butilamina en el Clavulanato Potásico.
Pureza cromatográfica Realizar la determinación como se describe en la «Cromatografía líquida de alta presión» (Apéndice 3.5).
Solución A Preparar una solución de dihidrogenofosfato de sodio 0,05 M, ajustar con ácido fosfórico a un pH de 4,0±0,1 y filtrar a través de un filtro de 0,5-μm o de porosidad más fina.
Solución B Preparar una mezcla de volúmenes iguales de solución A y metanol.
Fase móvil Utilizar mezclas variables de solución A y solución B como se indica para el sistema cromatográfico. Realice ajustes en cualquiera de las soluciones según sea necesario.
Solución estándar Prepare una solución de Clavulanato de Litio RS en la Solución A que tenga una concentración conocida de aproximadamente 0,1 mg por ml.
Solución de prueba Prepare una solución de Clavulanato de Potasio en la Solución A que contenga 10.0 mg por ml.
Solución de resolución Preparar una solución de Clavulanato de Litio RS y amoxicilina en la Solución A que contenga 0,1 mg de cada uno por ml.
Sistema cromatográfico El procedimiento cromatográfico puede llevarse a cabo utilizando (a) una columna de acero inoxidable (10 cm × 4.6 mm) empaquetada con octadecilsilano unido químicamente a micropartículas porosas de sílice o cerámica (de 3 a 10 μm) y se mantiene a una temperatura constante de unos 40º, (b) fase móvil a un caudal de unos 1 ml por minuto, y (c) un fotómetro ultravioleta ajustado a 230 nm.
El sistema está programado para proporcionar una fase móvil que consiste en mezclas variables de solución A y solución B. El sistema se equilibra durante 15 minutos con un 100 por ciento de solución A, y se mantiene en esa composición durante 4 minutos después de la inyección de la solución bajo prueba, tras lo cual la proporción de solución B se incrementa linealmente de 0 a 50 por ciento durante un período de 11 minutos. El sistema se mantiene en esa composición durante 3 minutos y luego se cambia a la solución A al 100% durante 6 minutos. Para determinar la idoneidad del sistema cromatográfico, cromatografíe la solución de resolución y registre las respuestas de los picos como se indica en el procedimiento: los tiempos de retención relativos son aproximadamente 2,5 para la amoxicilina y 1,0 para el ácido clavulánico; el factor de simetría para el pico de ácido clavulánico no es superior a 2,0; la eficiencia de la columna determinada a partir del pico de ácido clavulánico no es inferior a 2000 platos teóricos; y el factor de resolución entre el pico de ácido clavulánico y el pico de amoxicilina no es inferior a 13. Cromatografíe la solución estándar y registre las respuestas de los picos como se indica en el Procedimiento: la desviación estándar relativa para las inyecciones repetidas no es superior al 2 por ciento.
Procedimiento Inyecte por separado volúmenes iguales (unos 20 μl) de solución estándar y solución de prueba en el cromatógrafo, registre los cromatogramas y mida las respuestas de los picos.
Cálculo Calcular el porcentaje, en términos de equivalente de clavulanato potásico, de cada impureza en el Clavulanato Potásico tomado por la expresión:
10(237.3/205,1)(C)(ri/rS),
en la que 237,3 es el peso molecular del clavulanato potásico; 205.1 es el peso molecular del clavulanato de litio; C es la concentración, en mg por ml, de clavulanato de potasio RS en la solución estándar; ri es la respuesta del pico de una impureza individual en el cromatograma obtenido de la solución de prueba; y rS es la respuesta del pico de ácido clavulánico en el cromatograma obtenido de la solución estándar. La suma de todos los picos de impurezas no es superior al 2 por ciento.
Análisis Llevar a cabo la determinación como se describe en la «Cromatografía líquida de alta presión» (Apéndice 3.5).
pH 4.4 Tampón fosfato sódico Disolver 7.8 g de dihidrogenofosfato de sodio en 900 ml de agua, ajustar con ácido fosfórico o hidróxido de sodio 10 M a un pH de 4,4±0,1, diluir con agua para hacer 1000 ml y mezclar.
Fase móvil Preparar una mezcla adecuada de 95 volúmenes de tampón de fosfato de sodio de pH 4,4 y 5 volúmenes de metanol. Realizar los ajustes necesarios.
Preparación estándar Disolver una cantidad exactamente pesada de Clavulanato de Litio RS en agua para obtener una solución con una concentración conocida de unos 250 μg por ml.
Preparación de ensayo Transferir unos 50 mg de Clavulanato de Potasio, pesados con precisión, a un matraz aforado de 200 ml, disolver en y diluir con agua hasta el volumen, y mezclar.
Solución de resolución Disolver una cantidad adecuada de amoxicilina en la preparación estándar para obtener una solución que contenga unos 0,5 mg de amoxicilina y 250 μg de clavulanato de litio por ml.
Sistema cromatográfico El procedimiento cromatográfico puede llevarse a cabo utilizando (a) una columna de acero inoxidable (30 cm × 4 mm) empaquetada con octadecilsilano unido químicamente a sílice porosa o micropartículas de cerámica (3 a 10 μm), (b) fase móvil a un flujo de aproximadamente 2 ml por minuto, y (c) un fotómetro ultravioleta ajustado a 220 nm.
Para determinar la idoneidad del sistema cromatográfico, cromatografiar la solución de resolución, y registrar las respuestas de los picos como se indica en Procedimiento: el factor de resolución entre los picos de amoxicilina y ácido clavulánico no es inferior a 3,5 y los tiempos de retención relativos son de aproximadamente 0,5 para el ácido clavulánico y 1,0 para la amoxicilina. Cromatografiar la preparación estándar y registrar las respuestas de los picos como se indica en Procedimiento: el factor de simetría para el pico de ácido clavulánico no es superior a 1,5 y la desviación estándar relativa para las inyecciones repetidas no es superior al 2,0%.
Procedimiento Inyectar por separado volúmenes iguales (unos 20 μl) de la preparación estándar y de la preparación de ensayo en el cromatógrafo, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales.
Cálculo Calcular el contenido de C8H9NO5 en el Clavulanato de Potasio tomado, utilizando el contenido declarado de C8H9NO5 en el Clavulanato de Litio RS.