Autorradiografía

Autoradiography

Autorradiografía de un Southern Blot

La autorradiografía es una clase de técnicas en las que las posiciones del material biológico marcado con radioisótopos hace un autorradiograma («autofoto»). Los radioisótopos como el 14C, 32P, 35S emiten una radiación que expone la película fotográfica o de rayos X. La sustitución del 32P en la columna vertebral del ADN, o del 35S en los aminoácidos que contienen azufre, permite detectar las moléculas etiquetadas..

Un filtro Southern Blot se coloca dentro de una caja de casete a prueba de luz (izquierda) y se cubre con una hoja de película de rayos X. El casete se cierra y se deja durante varias horas o varios días. El ADN marcado con radioisótopos expone la película, que al revelarse muestra un patrón de bandas negras que indican las posiciones del ADN marcado en el blot. Las marcas de alineación en tres de las cuatro esquinas se realizan con una tinta especial que también expone la película. El blot puede alinearse con la película mediante las tres marcas de alineación (con las marcas, sólo es posible una alineación). En algunos experimentos, la alineación puede utilizarse para localizar una banda particular de ADN en el blot y cortarla, para recuperar el ADN para otros experimentos.

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