Citometría de masas
La citometría de masas, o CyTOF (Fluidigm), es una variación de la citometría de flujo en la que los anticuerpos se marcan con etiquetas de iones de metales pesados en lugar de fluorocromos. La lectura se realiza por espectrometría de masas de tiempo de vuelo. Esto permite la combinación de muchas más especificidades de anticuerpos en una sola muestra, sin que se produzca un desbordamiento significativo entre los canales. Disponemos de paneles estandarizados para inmunofenotipado, fenotipado+tinción de citoquinas intracelulares (ICS), y fenotipado+fosfo-CyTOF, cada uno con 30 a 38 anticuerpos. Póngase en contacto con [email protected] para obtener más detalles.
Fenotipado inmunológico: Nuestro panel de inmunofenotipado CyTOF de 33 anticuerpos está diseñado para su uso con PBMC criopreservadas, aunque podría adaptarse a otros tipos de muestras. Se puede añadir un número limitado de anticuerpos adicionales a los canales abiertos, sujeto a disponibilidad.
Citoquinas intracelulares: Nuestro panel CyTOF ICS de 38 anticuerpos está dirigido principalmente a la disección de las respuestas de las células T. Son posibles sustituciones limitadas (con las más comunes de la lista).
Fosfo-CyTOF: Nuestro panel de 30 anticuerpos fosfo-CyTOF puede utilizarse con los estímulos indicados para leer una amplia gama de vías de señalización en muchos subconjuntos celulares diferentes. Las adiciones o sustituciones en este panel son más difíciles, debido al requisito de que los anticuerpos marcadores de superficie funcionen bien en epítopos fijos.
Vea aquí la lista de anticuerpos estándar en estos tres paneles CyTOF. (revisado en junio de 2018)
Para una entrevista en vídeo con el Dr. Mike Leipold sobre cuestiones experimentales de CyTOF, consulte https://www.youtube.com/watch?v=UYYq9jh7FgQ.
Instrucciones para el usuario
1. Planificación de su ensayo: Los ensayos CyTOF se ejecutan en lotes de hasta 12 muestras. Si tiene más muestras, intente aleatorizar sus lotes para que, por ejemplo, los casos y los controles no se separen en lotes distintos.
2. Recogida de las muestras: Por favor, utilice un PROTOCOLO DE CRIOPRESERVACIÓN optimizado para PBMC viables. Recomendamos congelar 10^7 células por criovial, y suministrar un criovial para cada uno de los ensayos anteriores. Los servicios de procesamiento y criopreservación de PBMC también están disponibles a través de nuestra Unidad de Procesamiento de Sangre.
3. Ejecución de sus muestras: Se requiere un pedido en línea antes de poder ejecutar las muestras. El tiempo de entrega varía en función del tamaño de su proyecto y de la carga de trabajo actual; los proyectos más pequeños suelen completarse en un plazo de 3 a 4 semanas desde la realización del pedido y la entrega de la muestra.
4. Análisis de datos: Proporcionamos un análisis de datos estándar utilizando el software FlowJo. Un informe de Excel con los porcentajes de todas las poblaciones gated, así como los pdf de los resultados de gating y todos los archivos fcs, se proporcionan a través de Google Drive. Para los paneles estándar, los datos de Excel se cargan simultáneamente en nuestra base de datos en línea, Stanford Data Miner, donde se pueden integrar con otros datos HIMC de su laboratorio, así como con datos clínicos/demográficos, si se proporcionan. Haga clic en el enlace de ayuda en la esquina superior izquierda de la página de inicio de Data Miner para obtener instrucciones sobre el uso de este sistema.
La consulta estadística está disponible a través del Servicio de Consultoría Estadística de HIMC.
Protocolos
Por favor, consulte nuestra página de Protocolos para obtener protocolos de laboratorio detallados, así como descripciones breves adecuadas para publicaciones o solicitudes de subvención.
Información adicional:
- Revisión de citometría de masas (Trends in Immunology)
- Análisis de datos CyTOF en FlowJo