Un cromatograma es esencialmente el resultado de una corrida cromatográfica. Es un archivo electrónico o una copia impresa que contiene la información generada durante la corrida cromatográfica.
Hay muchas variaciones diferentes en lo que se muestra en un cromatograma – dependiendo de las configuraciones utilizadas en cada laboratorio y de cualquier requisito reglamentario. Como ejemplo, el mínimo mostrado en una corrida de GC de una muestra en proceso podría ser:
- Identificación de la muestra (Producto, número de lote, número de etapa)
- Información sobre la muestra (peso o concentración de la muestra)
- Fecha y hora en que se realizó la inyección
- Nombre o identificación del analista
- Identificación del instrumento y nombre del método analítico utilizado
- Nombre de archivo y ubicación de los datos brutos generados durante la corrida
- Grabación de la carta que muestra los picos generados y la línea de base, conocida como traza
- Tabla de resultados (que contiene los datos brutos y los datos calculados)
Hoy en día es un proceso muy automatizado para generar una tabla de resultados, pero no siempre fue tan sencillo….
Papel cuadriculado y tijeras
Antes de que el análisis de datos y la integración digital se convirtieran en el estándar – el papel cuadriculado y las tijeras se encontraban en la estantería de todo analista.
Un registrador de gráficos, vinculado al detector, registraba la traza directamente en el papel cuadriculado o en el papel cuadriculado utilizando un bolígrafo de tinta. A partir de la traza, había dos métodos comúnmente utilizados para elaborar los resultados:
Contar cuadrados:
El analista utilizaba una regla y un bolígrafo para dibujar la mejor forma de pico (triángulo) y la línea de base. A continuación, se contó el número de cuadrados de cada triángulo. Este recuento se utilizó entonces junto con la atenuación del detector y se calculó la composición de la muestra.
Corte y pesaje:
Se construyó una línea de base para los picos que se registraron. A continuación se recortaron los picos y se pesaron. El área de los picos es proporcional al peso, siempre que el grosor y el contenido de humedad del papel sean uniformes. Para aumentar la precisión se podían utilizar trucos como fotocopiar la traza y ampliarla.
Como se puede ver en las imágenes, los picos superpuestos y las muestras que contienen muchos constituyentes diferentes podrían causar graves problemas a un analista. Ahora, los ordenadores ayudan a reducir los errores.
Lectura de un cromatograma
Aunque la instrumentación moderna ha eliminado gran parte de las conjeturas de los días de papel y tijeras, la capacidad de leer e interpretar un cromatograma es igual de importante hoy en día.
Siempre debe comprobarse la traza, ya que será el primer indicio de que algo ha ido mal en la cromatografía. Algunas comprobaciones sencillas son:
- ¿Se ve bien la línea de base, plana y sin demasiado ruido?
- ¿Son aceptables las formas de los picos? No hay demasiada asimetría, son agradables y nítidas y se ajustan a la escala
- ¿Hay el número correcto de picos? ¿Hay picos de más o de menos?
- ¿Se han identificado correctamente los picos de referencia y de patrón interno, y los tiempos de retención son correctos?
Aunque todos los datos se registran y se hacen cálculos para el analista, es tarea de éste asegurarse de que no se han cometido errores. En este artículo se discute el análisis de datos en los sistemas modernos: Automated Analysis of Open-Access HPLC Instrumentation Metrics.