Abstract
En 1992 comunicamos un nuevo método de secuenciación de proteínas desde el carboxi-terminal (C-terminal) (Boyd et al., 1992). En los últimos 2 años, hemos continuado nuestras investigaciones, incluyendo el mecanismo de la activación inicial del grupo carboxilo C-terminal y las modificaciones deliberadas de las cadenas laterales reactivas de los aminoácidos con los reactivos de secuenciación. Mediante la selección de los reactivos y las condiciones de reacción utilizadas para nuestro protocolo de secuenciación, se derivatiza el ácido aspártico, el ácido glutámico, la serina y la treonina. La amidación de los ácidos aspártico y glutámico, y la acetilación de la serina y la treonina, han permitido mejorar los rendimientos de la secuenciación de estos residuos. El ácido aspártico y el ácido glutámico se clasifican ahora, como se ve en la Tabla 1, como residuos de aminoácidos fácilmente secuenciables. Nuestro criterio para determinar si un residuo es llamado de forma fiable es la capacidad de secuenciar y detectar ese residuo cuando está presente en una nanomolécula de una muestra de proteína. Por término medio, es posible secuenciar 5 ciclos en una nanomolécula de proteína aplicada a una membrana de difluoruro de polivinilideno (PVDF) si la secuencia de aminoácidos contiene los residuos enumerados en la columna «llamada fiable» de la Tabla 1. Nuestro objetivo para la conferencia de la MPSA de 1994 es ilustrar la utilidad actual de este método de secuenciación C-terminal en la secuenciación de proteínas inmovilizadas en PVDF.