Kategoria Beetalaktaasin estäjä.
Klavulanaattikalium sisältää vähintään 75,5 prosenttia ja enintään 92,0 prosenttia C8H9NO5-ekvivalenttia vedettömänä laskettuna.
Pakkaaminen ja varastointi Klavulanaattikalium on säilytettävä tiiviisti suljetuissa säiliöissä ja varastoitava 2º ja 8º:n välisessä lämpötilassa.
Merkinnät Pakkauksen merkinnöissä on mainittava (1) säilytysolosuhteet; (2) parenteraalinen tai muu kuin parenteraalinen laatuluokka.
Tunnistus
A. Assay-valmisteen kromatogrammissa, joka on saatu Assay-ohjeiden mukaisesti, on klavulaanihapon pääpiikki, jonka retentioaika vastaa Assay-ohjeiden mukaisesti saadun standardivalmisteen kromatogrammissa esiintyvää piikkiä.
B. Se tuottaa kaliumsuoloille ominaisia reaktioita (lisäys 5.1).
pH 5,5-8,0, 1,0-prosenttisessa w/v-liuoksessa (lisäys 4.11).
Vesi Enintään 1,5 painoprosenttia (Karl Fischerin menetelmä, lisäys 4.12).
Klavami-2-karboksylaattikalium Enintään 0,01 prosenttia. Suoritetaan määritys ”Korkeapainenestekromatografia” -menetelmässä (lisäys 3.5) kuvatulla tavalla.
Liikkuva faasi Valmistetaan 0,1 M natriumdivetyfosfaatti, säädetään fosforihapolla pH:ksi 4,0 ± 0,1 ja suodatetaan kalvosuodattimen läpi, jonka huokoisuus on 0,5 μm tai hienompi. Tee tarvittaessa säätöjä. Standardiliuos Liuotetaan Clavam-2-Carboxylate Potassium RS veteen, jotta saadaan liuos, jonka tunnettu pitoisuus on noin 40 μg/ml.
Testiliuos Siirretään noin 100 mg tarkasti punnittua Clavulanate Potassium -valmistetta 10 ml:n mittapulloon, liuotetaan ja laimennetaan vedellä tilavuuteen asti ja sekoitetaan.
Resoluutioliuos Liuotetaan sopiva määrä klavulanaattikaliumia standardiliuokseen, jotta saadaan liuos, joka sisältää noin 1 mg klavulanaattikaliumia ja 30 μg klavam-2-karboksylaattikaliumia millilitrassa.
Kromatografinen järjestelmä Kromatografinen menetelmä voidaan suorittaa käyttämällä a) ruostumattomasta teräksestä valmistettua kolonnia (30 cm × 4 mm), joka on pakattu huokoisiin piidioksidi- tai keraamisiin mikrohiukkasiin (3-10 μm) kemiallisesti sidotulla oktadekyylisilaanilla, b) liikkuvaa faasia virtausnopeudella 0,5 ml minuutissa ja c) ultraviolettifotometriä, joka on asetettu 210 nm:lle.
Kromatografisen järjestelmän soveltuvuuden määrittämiseksi kromatografoidaan standardiliuos ja kirjataan piikkivasteet kohdan Menetelmä mukaisesti: symmetriakerroin on enintään 1,5 ja suhteellinen standardipoikkeama toistettujen injektioiden osalta on enintään 2,0 %. Kromatografoidaan resoluutioliuos ja kirjataan piikkivasteet kohdan Menettely mukaisesti: klavami-2-karboksyylihappo- ja klavulaanihappopiikkien välinen resoluutiokerroin on vähintään 1,0.
Menettely Ruiskutetaan kromatografiin erikseen yhtä suuret tilavuudet (noin 20 μl) standardiliuosta ja testiliuosta, kirjataan kromatogrammit ja mitataan tärkeimpien piikkien vasteet. Suhteelliset retentioajat ovat noin 0,7 klavami-2-karboksyylihapolle ja 1,0 klavulaanihapolle. Lasketaan klavami-2-karboksylaattikaliumin prosenttiosuus
Metanolin ja tert-butyyliamiinin raja Metanolia enintään 0,1 painoprosenttia tai tert-butyyliamiinia enintään 0,2 painoprosenttia. Määritys tehdään ”Kaasukromatografiassa” (lisäys 3.4) kuvatulla tavalla.
Vakioliuos 100 ml:n mittapulloon, joka sisältää 50,0 ml 3 M natriumhydroksidia, lisätään noin 6 ml metanolia ja 12 ml tert-butyyliamiinia, jotka molemmat on punnittu tarkasti, laimennetaan 3 M natriumhydroksidilla tilavuuteen ja sekoitetaan. Siirretään 10,0 ml tätä kantaliuosta toiseen 100 ml:n mittapulloon, laimennetaan 3 M natriumhydroksidilla tilavuuteen ja sekoitetaan. Siirretään 10,0 ml tätä liuosta kolmanteen 100 ml:n mittapulloon, laimennetaan 3 M natriumhydroksidilla tilavuuteen ja sekoitetaan. Siirretään 7,0 ml tätä liuosta neljänteen 100 ml:n mittapulloon, lisätään 3,0 ml 3 M natriumhydroksidia, laimennetaan 4-metyyli-2-pentanolilla tilavuuteen ja sekoitetaan. Annetaan faasien erottua toisistaan ja käytetään kirkasta metyyli-isobutyyliketonikerrosta standardiliuoksena. Tämä liuos sisältää noin 36,6 μg metanolia ja 63,8 μg tert-butyyliamiinia millilitrassa. Käytä tämä liuos 5 tunnin kuluessa.
Testiliuos Siirrä noin 3 g tarkasti punnittua klavulanaattikaliumia 100 ml:n mittapulloon, lisää 10,0 ml 3 M natriumhydroksidia ja ravista kunnes se on liuennut. Annetaan jäähtyä kylmässä vesihauteessa, laimennetaan 4-metyyli-2-pentanoonilla tilavuuteen, suljetaan pullo ja ravistetaan voimakkaasti 3 minuutin ajan välillä tuulettaen. Annetaan faasien erottua toisistaan ja käytetään kirkasta metyyli-isobutyyliketonikerrosta testiliuoksena. Tämä liuos käytetään 5 tunnin kuluessa.
Kromatografinen järjestelmä Kromatografinen menetelmä voidaan suorittaa käyttämällä a) lasikolonnia (30 m × 0,32 mm), joka on päällystetty dimetyylipolysiloksaaniöljyn stationäärisellä faasilla ja jota pidetään 40º:n lämpötilassa, jonka jälkeen se ohjelmoidaan nousemaan 55º:n minuuttivauhdilla 200º:n lämpötilaan ja pidetään tässä lämpötilassa 4 minuutin ajan, b) injektioporttia ja detektorilohkoa pidetään 150º:n lämpötiloissa, c) typpeä kantajakaasuna ja d) liekki-ionisaatiodetektoria. Kromatografiajärjestelmän soveltuvuuden määrittämiseksi kromatografoidaan standardiliuos ja kirjataan metanolin, tert-butyyliamiinin ja metyyli-isobutyyliketonin piikkivasteet Menetelmän ohjeiden mukaisesti: symmetriakerroin on enintään 1.6 metanoli- ja tert-butyyliamiinipiikkien osalta; pylvään hyötysuhde on vähintään 25 000 teoreettista levyä; metanolipiikin ja tert-butyyliamiinipiikin välinen erotuskerroin on vähintään 20 ja tert-butyyliamiinipiikin ja 4-metyyli-2-pentanoni-piikin välinen erotuskerroin on vähintään 10; ja suhteellinen standardipoikkeama toistettujen injektioiden osalta on enintään 10 prosenttia.
Menettely Ruiskutetaan kromatografiin erikseen yhtä suuria määriä (noin 1 μl) standardiliuosta ja testiliuosta, kirjataan kromatogrammit ja mitataan metanoli- ja tert-butyyliamiinipiikkien vasteiden pinta-alat.
Laskenta Lasketaan metanolin ja tert-butyyliamiinin prosentuaaliset pitoisuudet klavulanaattikaliumissa.
Kromatografinen puhtaus Suoritetaan määritys siten kuin on kuvattu ohjeessa ”Korkeapaine-nestekromatografia” (lisäys 3.5).
Liuos A Valmistetaan 0,05 M natriumdivetyfosfaattiliuos, säädetään fosforihapolla pH:ksi 4,0±0,1 ja suodatetaan 0,5μm:n tai hienompihuokoisella suodattimella.
Liuos B Valmistetaan seos, jossa on yhtä monta tilavuutta liuosta A ja metanolia.
Liikkuva faasi Käytetään vaihtelevia liuoksen A ja liuoksen B seoksia kromatografisen järjestelmän ohjeiden mukaisesti. Tee tarvittaessa säätöjä kumpaankin liuokseen.
Vakioliuos Valmistetaan liuokseen A klavulanaattilitium RS -liuos, jonka tunnettu pitoisuus on noin 0,1 mg/ml.
Testiliuos Valmistetaan liuokseen A klavulanaattikaliumliuos, joka sisältää 10 mg/ml.0 mg millilitrassa.
Resoluutioliuos Valmistetaan klavulanaattilitium RS:n ja amoksisilliinin liuos liuoksessa A, jossa on 0,1 mg kumpaakin millilitrassa.
Kromatografinen järjestelmä Kromatografinen menettely voidaan suorittaa käyttämällä a) ruostumattomasta teräksestä valmistettua pylvästä (10 cm x 4.6 mm), joka on pakattu oktadekyylisilaanilla, joka on kemiallisesti sidottu huokoisiin piidioksidi- tai keraamisiin mikrohiukkasiin (3-10 μm), ja jota pidetään vakiolämpötilassa, joka on noin 40º, (b) Liikkuva faasi virtausnopeudella noin 1 ml minuutissa ja (c) ultraviolettifotometri, joka on asetettu 230 nm:lle.
Järjestelmä on ohjelmoitu tuottamaan liikkuva faasi, joka koostuu liuoksen A ja liuoksen B vaihtelevista seoksista. Järjestelmä tasapainotetaan 15 minuutin ajan 100-prosenttisella liuoksella A ja pidetään tässä koostumuksessa 4 minuuttia testattavan liuoksen injektoinnin jälkeen, minkä jälkeen liuoksen B osuutta lisätään lineaarisesti 0:sta 50 prosenttiin 11 minuutin aikana. Järjestelmää pidetään tässä koostumuksessa 3 minuuttia, minkä jälkeen se vaihdetaan 100-prosenttiseen liuokseen A 6 minuutiksi. Kromatografisen järjestelmän soveltuvuuden määrittämiseksi kromatografoidaan resoluutioliuos ja kirjataan piikkivasteet menettelyn ohjeiden mukaisesti: suhteelliset retentioajat ovat amoksisilliinille noin 2,5 ja klavulaanihapolle 1,0; klavulaanihappopiikin symmetriakerroin on enintään 2,0; klavulaanihappopiikistä määritetty pylvään hyötysuhde ei ole alle 2000 teoreettista levyä ja klavulaanihappopiikin ja amoksisilliinipiikin välinen resoluutiokerroin ei ole alle 13. Tämän jälkeen kromatografoidaan kromatografiakuva. Kromatografoidaan standardiliuos ja kirjataan piikkivasteet ohjeiden mukaisesti Menetelmä: toistettujen injektioiden suhteellinen standardipoikkeama on enintään 2 %.
Menettely Ruiskutetaan kromatografiin erikseen yhtä suuria määriä (noin 20 μl) standardiliuosta ja testiliuosta, kirjataan kromatogrammit ja mitataan piikkivasteet.
Laskenta Lasketaan kunkin epäpuhtauden prosenttiosuus klavulanaattikaliumekvivalenttina ilmaistuna otetussa klavulanaattikaliumissa lausekkeella:
10(237.3/205.1)(C)(ri/rS),
jossa 237.3 on klavulanaattikaliumin molekyylipaino; 205.1 on klavulanaattilitiumin molekyylipaino; C on klavulanaattikalium RS:n konsentraatio mg:na millilitrassa standardiliuoksessa; ri on yksittäisen epäpuhtauspiikin vaste kromatogrammissa, joka on saatu testiliuoksesta; ja rS on klavulaanihappopiikin vaste kromatogrammissa, joka on saatu standardiliuoksesta. Kaikkien epäpuhtauspiikkien summa on enintään 2 prosenttia.
Määritys Suoritetaan määritys ”Korkeapainenestekromatografia” -ohjeessa (lisäys 3.5) kuvatulla tavalla.
pH 4,4 Natriumfosfaattipuskuri Liuotetaan 7 %.8 g natriumdivetyfosfaattia 900 ml:aan vettä, säädetään fosforihapolla tai 10 M natriumhydroksidilla pH:ksi 4,4 ± 0,1, laimennetaan vedellä 1000 ml:ksi ja sekoitetaan.
Liikkuva faasi Valmistetaan sopiva seos 95 tilavuudesta pH 4,4 -natriumfosfaattipuskuria ja 5 tilavuudesta metanolia. Tee tarvittaessa säätöjä.
Vakiovalmiste Liuotetaan tarkasti punnittu määrä Clavulanate Lithium RS:ää veteen, jotta saadaan liuos, jonka tunnettu pitoisuus on noin 250 μg/ml.
Tutkimusvalmiste Siirretään noin 50 mg klavulanaattikaliumia tarkasti punnittuna 200 ml:n mittapulloon, liuotetaan ja laimennetaan vedellä tilavuuteen ja sekoitetaan.
Liuotusliuos Liuotetaan sopiva määrä amoksisilliinia vakiovalmisteeseen niin, että saadaan liuos, jossa on noin 0,5 mg amoksisilliinia ja 250 μg klavulanaattilitiumia ml:ssa.
Kromatografinen järjestelmä Kromatografinen menetelmä voidaan suorittaa käyttämällä a) ruostumattomasta teräksestä valmistettua kolonnia (30 cm × 4 mm), joka on pakattu huokoisiin piidioksidi- tai keraamisiin mikrohiukkasiin (3-10 μm) kemiallisesti sidotulla oktadekyylisilaanilla, b) liikkuvaa faasia virtausnopeudella noin 2 ml minuutissa ja c) ultraviolettifotometriä, joka on asetettu 220 nm:lle.
Kromatografioidaan resoluutioliuos kromatografisesti ja kirjataan piikkivasteet kohdan Menetelmä mukaisesti: amoksisilliini- ja klavulaanihappopiikkien välinen erotuskerroin on vähintään 3,5 ja suhteelliset retentioajat ovat klavulaanihapolla noin 0,5 ja amoksisilliinilla 1,0. Kromatografioidaan kromatografisesti ja kirjataan piikkivasteet kohdan Menetelmä mukaisesti. Kromatografoidaan standardivalmiste ja kirjataan piikkivasteet kohdan Menettely mukaisesti: klavulaanihappopiikin symmetriakerroin on enintään 1,5 ja toistoinjektioiden suhteellinen standardipoikkeama on enintään 2,0 prosenttia.
Menettely Ruiskutetaan kromatografiin erikseen yhtä suuria määriä (noin 20 μl) standardivalmistetta ja määritysvalmistetta, kirjataan kromatogrammit ja mitataan tärkeimpien piikkien vasteet.
Laskenta Lasketaan otetun klavulanaattikaliumin C8H9NO5-pitoisuus käyttäen klavulanaattilitium-RS:n ilmoitettua Clavulanate Lithium RS:n sisältämää C8H9NO5-pitoisuutta.