Autoradiografia

Autoradiography

Autoradiografia Southern Blot

Autoradiografia on tekniikoiden luokka, jossa radioisotooppimerkityn biologisen materiaalin sijainnit muodostavat autoradiogrammin (”omakuvan”). Radioisotoopit, kuten 14C, 32P ja 35S, säteilevät säteilyä, joka valottaa valokuva- tai röntgenfilmiä. Kun 32P:tä substituoidaan DNA:n selkärankaan tai 35S:ää rikkiä sisältäviin aminohappoihin, voidaan havaita leimattuja molekyylejä..

Southern Blot -suodatin asetetaan valonkestävään kasettilaatikkoon (vasemmalla) ja peitetään röntgenfilmiarkilla. Kasetti suljetaan ja jätetään useista tunneista useisiin päiviin. Radioisotooppimerkitty DNA valottaa filmiä, joka kehitettäessä näyttää mustien kaistojen kuvion, joka osoittaa merkityn DNA:n paikat blotissa. Kohdistusmerkit neljästä kulmasta kolmeen tehdään erityisellä musteella, joka myös valottaa filmiä. Blot voidaan kohdistaa filmiin kolmen indeksimerkin avulla (näiden merkkien avulla on mahdollista tehdä vain yksi kohdistus). Joissakin kokeissa kohdistuksen avulla voidaan paikallistaa tietty DNA-kaistale blotista ja leikata se pois, jotta DNA saadaan talteen jatkokokeita varten.

Jätä kommentti