Immunosytokemia kohdunkaulan intraepiteliaalisessa neoplasiassa ja invasiivisessa syövässä
Kohdunkaulan intraepiteliaalisen neoplasian luokittelu, sytopatologit tukeutuvat sytomorfologisiin kriteereihin, kuten ydinhyperkromaasiaan, ydinatypiaan ja nukleosytoplasman suhteeseen. Tämä luokittelumuoto ei pysty ennustamaan CIN-muutosten biologista käyttäytymistä. On kehitetty valtava määrä biologisia merkkiaineita tai korvaavia loppupisteen biomarkkereita, jotka soveltuvat suurelta osin histologisiin kohdunkaulan kudoksiin. Näitä merkkiaineita pidetään yleensä ”erittäin lupaavina”, koska ne ennustavat oikein kohdunkaulan leesioiden regressiivistä tai progressiivista käyttäytymistä. Päivittäisessä käytännössä näiden merkkiaineiden soveltuvuus on melkoinen pettymys. Koska varhaisimmat havainnot viittaavat siihen, että CIN:iin liittyy kohdunkaulan epiteelisolujen proliferatiivisen aktiivisuuden asteittainen häiriö, useimmat kehitetyistä biologisista merkkiaineista ovat proteiineja, joilla on ratkaiseva rooli solusyklin säätelyreitillä. Luvussa 1 on laaja yleiskatsaus näistä biologisista merkkiaineista, jotka on erityisesti varustettu kohdunkaulan histologiaa varten. Kohdunkaulan sytologiassa biologisten merkkiaineiden valikoima on historiallisesti paljon rajoitetumpi, koska seulonta tehdään Papanicolaou-värjättyjen preparaattien avulla, eikä yleensä ole muuta materiaalia lisätutkimuksia varten. Lisäksi jos immunosytokemian tekeminen suorista märistä sytologisista näytteistä, kuten nestepohjaisesta sytologiasta, halutaan onnistua, lievä lyhyt fiksaatio alkoholiin tai asetoniin on välttämätöntä. Vain erittäin ammattitaitoisissa ja hyvin valvotuissa laboratorioissa tämä lievä fiksaatio voidaan suorittaa asianmukaisesti, jotta voidaan saada toistettavissa olevia immunosytokemiallisia värjäystuloksia. Tätä ongelmaa ei esiinny histologiassa, koska kudokset fiksoidaan rutiininomaisesti formaliiniin.
Yksittäisille keratiineille tarkoitettujen ketjuspesifisten monoklonaalisten vasta-aineiden (mAb:iden) kehittäminen mahdollistaa immunosytokemiallisen eron tekemisen varasolujen, epäkypsän ja kypsän levyepiteelimetaplasian ja normaalin ektokervikaalisen levy- ja endokervikaalisen pylväsmäisen epiteelin sekä erityyppisten epiteelipoikkeavuuksien (CIN-luokkien 1., 2. ja 3. asteen) välillä.123,228-230
Käyttämällä useita monoklonaalisia vasta-aineita, jotka on suunnattu saman keratiinipolypeptidin eri epitooppeja vastaan (esim. eri mAb:t keratiini 18:aa vastaan), on mahdollista havaita biologisesta toiminnasta tai neoplastisesta transformaatiosta johtuvia rakenteellisia muutoksia. Keratiini 10 tai 13 -vasta-aineiden avulla voidaan määrittää levyepiteelisyövän erilaistumisaste. Keratiini 10 on keratinisaation merkkiaine. Se voi ilmentyä levyepiteelin pinnallisempien kerrosten soluissa, vaikka valomikroskooppisesti ei olisikaan havaittavissa merkkejä keratinisaatiosta.
Laaja-alaisesti ristireagoivat mAb:t antavat positiivisia reaktioita lähes kaikissa epiteelikudoksissa ja primaarisissa ja metastaattisissa epiteelisyyövissä, mukaan lukien eri erilaistumisasteiset levyepiteelikarsinoomat ja pienisoluiset anaplastiset karsinoomat. Keratiini 18:n vasta-aineilla voidaan tunnistaa muun muassa adenokarsinoomat, mutta ne eivät yleensä reagoi levyepiteelikarsinoomien kanssa.231 Adenokarsinoomat ovat lähes aina negatiivisia keratiini 5:n, 10:n, 13:n ja 16:n suhteen. Okasolukarsinoomat ovat lähes aina positiivisia keratiinien 5, 10 ja 13 suhteen. Keratiini 16:n ilmentyminen rajoittuu keratinisoiviin levyepiteelikarsinoomiin. Keratiini 7 mAb:t eivät yleensä antaneet värjäysreaktiota (keratinisoivissa) levyepiteeleissä. Tämä vasta-aine reagoi kohdunkaulan pylvässolujen kanssa.232
Moll ja työtoverit osoittivat sytokeratiinien 5, 7, 8, 17, 18 ja 19 esiintymisen epäkypsässä levyepiteelimetaplasiassa ja muuttuneen keratiinin ilmentymismallin kypsässä levyepiteelissä ja lievässä dysplasiassa233 (kuva 8.125). He havaitsivat invasiivisessa karsinoomassa samanlaisen kuvion kuin kypsässä levyepiteelissä.
Smedts ja kollegat havaitsivat epänormaalissa kohdunkaulan epiteelissä sytokeratiini 10:n, 11:n, 13:n ja 16:n jakautuvan epäsäännöllisesti CIN-luokassa 3.234,235 He havaitsivat positiivisuuden jakautumisen olevan laikuttaista. Positiiviset alueet vuorottelivat negatiivisten alueiden kanssa. He eivät pystyneet osoittamaan sytokeratiinipitoisuuden johdonmukaista ja progressiivista muutosta normaalista epiteelistä CIN-luokkiin 1 ja 2. Heidän havaintonsa viittaavat siihen, että äkillinen muutos tapahtui morfologisesti CIN-asteeksi 3 kuvatun vaurion kehittyessä. CIN-luokan 2 leesioilla kohdunkaulan sisäkäytävän kuroutumissa oli samanlainen kuvio kuin kanavan pinnalla olevilla leesioilla. CIN-asteen 3 värjäytymiskuvio oli verrattavissa invasiivisen levyepiteelikarsinooman värjäytymiskuvioon. Puts ja kumppanit käyttivät keratiinien antikokeratiinivasta-aineita eivätkä havainneet värjäytymisreaktioissa laadullisia eroja eriasteisten epiteelileesioiden välillä.236 He havaitsivat vaihtelevan määrän Langerhansin soluja 32 dysplastisessa leesiossa, mutta he eivät havainneet erilaista jakaantumismallia eriasteisten leesioiden välillä.6 He arvelivat, että Langerhanin solujen lukumäärän erot saattaisivat korreloida eroihin dysplastisissa prosesseissa sekä eroihin isännän vasteessa, ja näin ollen ne voisivat mahdollisesti olla indikaattori taipumuksesta regressioon tai etenemiseen.
Smedts ja työtoverit tutkivat keratiinien ilmentymistä normaaleissa kohdunkaulan epiteeleissä, metaplastisessa epiteelissä ja CIN-luokissa 1, 2 ja 3 ketjuspesifisten mAb:iden paneelilla.237,238 Tämä mahdollisti yksittäisten keratiinien 4, 5, 7, 8, 10, 13, 14, 18 ja 19 havaitsemisen yhden solun tasolla. Tulokset osoittivat, että reservisolujen muuttuessa epäkypsäksi levyepiteeliksi tämä epiteeli sai ektokervikaaliselle levyepiteelille tyypillisiä keratiineja, kun taas reservisoluille ja pylväsmäisille soluille tyypilliset keratiineja menetettiin. Tämä muutos jatkui edelleen erilaistuessaan kypsäksi levyepiteeliksi. Premaligni transformaatio johti levyepiteelille tyypillisten keratiinien osittaiseen häviämiseen ja yksinkertaiselle epiteelille epätyypillisten keratiinien hankkimiseen.
Epiteelin atypian lisääntyessä intraepiteelialueen neoplasian asteiden 1-3 kautta yksinkertaiselle epiteelille tyypillisiä keratiineja ilmestyy dysplastisiin leesioihin (kuva 8.126). CIN-luokassa 1 noin puolessa ja CIN-luokassa 2 (keskivaikea dysplasia) kolmanneksessa tapauksista esiintyy jonkin verran hajanaisesti positiivisuutta keratiinien 8 ja 18 osalta, kun taas keratiini 19, joka kypsässä levyepiteelissä värjää tyvikerroksia, osoittaa nyt polariteetin häviämistä ja värjää yhä suuremman osan dysplastisen epiteelin koko paksuudesta, usein epäsäännöllisesti.
Kypsään levyepiteeliin verrattuna keratiinien 4, 5, 13 ja 14 ilmentyminen vähenee ja värjäytymiskuvio muuttuu vaihtelevaksi (kuvat 8.127 ja 8.128). Tämä viittasi siihen, että dysplastinen epiteeli, joka liittyi poikkeavuuden vaikeusasteen etenemiseen, menetti asteittain levyepiteelin keratiini-fenotyyppinsä ja sai yksinkertaisen epiteelin keratiiniominaisuuksia.
Nämä muutokset olivat vielä selvempiä CIN-asteen 3 tapauksissa; kaikissa tapauksissa keratiinien 8 ja 18 ilmentyminen oli runsasta ja keratiinien 13 ja 14 ilmentyminen väheni, ja joillakin alueilla se muuttui jopa kokonaan puuttuvaksi. Tämä korosti yksinkertaiselle epiteelille ominaisen keratiinikuvion lisääntynyttä ilmentymistä dysplastisten muutosten lisääntyessä.
Keratiinit 8, 18 ja 19 on löydetty kohdunkaulan levyepiteelikarsinoomista sekä adenokarsinoomasta. Näiden keratiinien ilmentyminen varasoluissa saattaa viitata siihen, että nämä solut ovat yhteisiä esisoluja, joilla on kaksinkertainen erilaistumispotentiaali, toisaalta metaplasia-vaiheen kautta levyepiteelipoikkeavuudeksi ja toisaalta erilaistumalla pylväsmaiseksi solutyyppiseksi poikkeavuudeksi. Levyepiteelityyppisten ja pylväsepiteelityyppisten keratiinien kaksoisekspressio epäkypsässä levyepiteelimetaplasiassa näyttää tukevan tätä hypoteesia.228,229
.