Komplementtijärjestelmä on seerumin proteiinien järjestelmä, joka reagoi antigeeni-vasta-ainekompleksien kanssa. Jos tämä reaktio tapahtuu solun pinnalla, se johtaa transmembraanihuokosten muodostumiseen ja siten solun tuhoutumiseen. Komplementtifiksaatiotestin perusvaiheet ovat seuraavat:
- Potilaasta erotetaan seerumi.
- Potilailla on luonnostaan erilaisia komplementtiproteiinipitoisuuksia seerumissa. Jotta tämän mahdolliset vaikutukset testiin voidaan mitätöidä, potilaan seerumin komplementtiproteiinit on tuhottava ja korvattava tunnetulla määrällä standardoituja komplementtiproteiineja.
- Seerumi kuumennetaan siten, että kaikki siinä olevat komplementtiproteiinit – mutta ei vasta-aineita – tuhoutuvat. (Tämä on mahdollista, koska komplementtiproteiinit ovat paljon herkempiä tuhoutumaan lämmön vaikutuksesta kuin vasta-aineet.)
- Seerumiin lisätään tunnettu määrä standardoituja komplementtiproteiineja. (Näitä proteiineja saadaan usein marsun seerumista.)
- Seerumiin lisätään kiinnostava antigeeni.
- Seerumiin lisätään lampaan punasoluja (sRBC), jotka on esisidottu anti-sRBC-vasta-aineisiin. Testiä pidetään negatiivisena, jos liuos muuttuu tässä vaiheessa vaaleanpunaiseksi, ja muussa tapauksessa positiivisena.
Jos potilaan seerumissa on vasta-aineita kiinnostuksen kohteena olevaa antigeenia vastaan, ne sitoutuvat antigeeniin vaiheessa 3 muodostaen antigeeni-vasta-ainekomplekseja. Komplementtiproteiinit reagoivat näiden kompleksien kanssa ja tyhjenevät. Näin ollen kun sRBC-vasta-ainekompleksit lisätään vaiheessa 4, seerumissa ei ole enää komplementtia. Jos kuitenkin vasta-aineita kiinnostavaa antigeenia vastaan ei ole, komplementti ei tyhjene ja se reagoi vaiheessa 4 lisättyjen sRBC-vasta-ainekompleksien kanssa lysoimalla sRBC:t ja vuodattamalla niiden sisällön liuokseen, jolloin liuos muuttuu vaaleanpunaiseksi.