Membraanipohjaisten sytokiinimääritysten ja muiden kohteiden vasta-ainemääritysten edut
Vasta-ainemääritysten avulla voidaan mitata useita proteiineja samanaikaisesti samassa kokeessa, ja tähän kuluu huomattavasti vähemmän aikaa, vaivaa ja kustannuksia kuin useiden ELISA-testien tai Western Blot -testien tekemiseen, joita tarvitaan samalle määrälle analyyttejä. Verrattuna muihin multipleksi-immunomäärityksiin, kuten helmi-pohjaisiin määrityksiin, kalvovasta-ainemääritykset ovat erittäin helppoja asentaa ja huomattavasti edullisempia vertailussa, kun on verrattava monia proteiineja pienestä määrästä näytteitä.
Vasta-ainemääritykset tarjoavat useita etuja:
- Ei vaadita erikoislaitteita
- Kemiluminesenssi-detektiomenetelmä on sama kuin western blotissa
- Soveltuu kaikkiin kemiluminesenssiblottien dokumentointijärjestelmiin
- Filmi kehittäjä tai penkkitason pimiö
- Ilmainen densitometri- ja pistetunnistusanalyysiohjelmisto
- Saatavilla ladattavaksi ilmaiseksi NIH:stä
- Soveltuu käytettäväksi Li-Cor® -tunnistusjärjestelmään Mukautettu array-protokolla Li-Cor®
- Suuri tunnistusalue
- Väli 10,000-kertainen havaitsemisalue (pg/ml)
- Duplikaattivasta-ainepisteet
- Vasta-aineet on spotattu kahtena kappaleena.
- Optimoitu kitti
- Vastaainearray-kittimme sisältää puskurit, detektiovasta-aineet ja kalvot.
Miten kalvopohjaiset vasta-ainemääritykset toimivat?
Vasta-ainemääritykset ovat vasta-ainepareihin perustuva määritys, joka on analoginen ELISA:n kanssa, mutta jossa käytetään kalvoa substraattina levyn sijaan. Sieppausvasta-aineet toimitetaan kalvolla ryhmiteltyinä/pilkullisina siten, että jokainen pilkkupari edustaa eri analyyttiä. Näyte lisätään (0,2-1 ml 1 näytettä kullekin kalvolle), minkä jälkeen lisätään pareittain biotinyloidut detektorivasta-aineet ja streptavidiini-HRP.
Array analysoidaan käyttäen samoja menetelmiä kuin kemiluminesenssi-westernblot. Näytteiden välinen vertailu voidaan tehdä silmämääräisesti tai käyttämällä densitometriaohjelmistoa puolikvantitatiivista vertailua varten. Koko määritys voidaan suorittaa yhden päivän aikana tai yön yli inkuboiden.