Kromatogrammi on lähinnä kromatografia-ajon tulos. Se on sähköinen tiedosto tai paperiversio, joka sisältää kromatografia-ajon aikana syntyneet tiedot.
Kromatogrammissa näkyvästä informaatiosta on monia eri variaatioita – riippuen kussakin laboratoriossa käytettävistä asetuksista ja mahdollisista viranomaisvaatimuksista. Esimerkkinä voidaan mainita, että prosessinäytteen GC-ajossa näytetään vähintään seuraavat tiedot:
- Näytteen tunniste (Tuote, eränumero, vaiheen numero)
- Näytetiedot (näytteen paino tai pitoisuus)
- Päivä ja kellonaika, jolloin injektio tehtiin
- Analyytikon nimi tai tunnistetiedot
- Laitteen tunnistetiedot ja käytetyn analyysimenetelmän nimi
- Jakson aikana syntyneiden raakadatan tiedostonimi ja sijainti
- Kaavion tallennus, josta käyvät ilmi syntyneet piikit ja lähtötaso, tunnetaan nimellä trace
- Tulostaulukko (sisältää raakatiedot ja lasketut tiedot)
Tulostaulukon luominen on nykyään pitkälti automatisoitu prosessi, mutta se ei aina ollut näin yksinkertaista…
Ruutupaperi ja sakset
Ennen kuin data-analyysistä ja digitaalisesta integraatiosta tuli standardi – kuvaajapaperi ja sakset löytyivät jokaisen analyytikon hyllystä.
Kaaviontallennin, joka oli kytketty ilmaisimeen, kirjasi jäljen suoraan ruutupaperille tai kuvaajapaperille tussikynällä. Jäljestä voitiin yleisesti laskea tulokset kahdella menetelmällä:
Neliöiden laskeminen:
Analyytikko käytti viivoitinta ja kynää piirtääkseen parhaan piikin muodon (kolmion) ja perusviivan. Tämän jälkeen laskettiin kussakin kolmiossa olevien neliöiden lukumäärä. Tätä lukumäärää käytettiin sitten yhdessä detektorin vaimennuksen kanssa, ja näytteen koostumus laskettiin.
Poikkileikkaus ja punnitus:
Rekisteröidyille piikeille muodostettiin perusviiva. Tämän jälkeen piikit leikattiin ja punnittiin. Piikin pinta-ala on verrannollinen painoon edellyttäen, että paperin paksuus ja kosteuspitoisuus ovat tasaiset. Tarkkuuden lisäämiseksi voitiin käyttää temppuja, kuten jäljen valokopiointia ja jäljen suurentamista.
Kuten voidaan kuvata, päällekkäiset piikit ja näytteet, jotka sisälsivät paljon eri ainesosia, saattoivat aiheuttaa analyytikolle vakavia ongelmia. Nyt tietokoneet auttavat vähentämään virheitä.
Kromatogrammin lukeminen
Vaikka nykyaikaiset instrumentit ovat poistaneet suuren osan paperi ja sakset -aikojen arvailuista, on kromatogrammin lukemisen ja tulkitsemisen taito nykyään yhtä tärkeää.
Jälki on aina tarkistettava, sillä se on ensimmäinen osoitus siitä, jos jokin on mennyt pieleen kromatografiassa. Yksinkertaisia tarkistuksia ovat esimerkiksi:
- Näyttääkö perusviiva hyvältä, tasaiselta ilman liikaa kohinaa?
- Onko piikkien muodot hyväksyttäviä? Ei liikaa epäsymmetriaa, mukavan teräviä ja mittakaavassa
- Onko piikkejä oikea määrä? Onko ylimääräisiä tai puuttuvia piikkejä?
- Onko referenssi- ja sisäisen standardin piikit tunnistettu oikein ja retentioajat kunnossa?
Vaikka kaikki tiedot on kirjattu ja laskelmat tehty analyytikkoa varten, on analyytikon tehtävä varmistaa, ettei virheitä ole tehty. Nykyaikaisten järjestelmien data-analyysia käsitellään tässä artikkelissa: Automated Analysis of Open-Access HPLC Instrumentation Metrics.