Mikrokefalia ASPM-geeni ilmentyy proliferoivissa kudoksissa ja koodaa mitoottista karaproteiinia

Primaarisen autosomaalisen resessiivisen mikrokefaliatulehduksen (MCPH) yleisin syy näyttäisi olevan mutaatioita ASPM-geenissä, joka on osallisena hermosolujen geeninmuodostuksen säätelyssä. Ennustettu geenituote sisältää kaksi oletettua N-terminaalista kalponiinihomologian (CH) domeenia ja lohkon oletettuja kalmoduliinia sitovia IQ-domeeneja, jotka ovat yleisiä aktiinia sitovissa sytoskeletti- ja signaaliproteiineissa. Aiemmat hiirillä tehdyt tutkimukset viittaavat siihen, että ASPM ilmentyy ensisijaisesti kehittyvissä aivoissa. Analyysimme paljastavat, että ASPM ilmentyy laajalti sikiö- ja aikuiskudoksissa ja että sitä säännellään pahanlaatuisissa soluissa. Tunnistettiin useita vaihtoehtoisesti splikoituneita variantteja, jotka koodaavat oletettuja ASPM-isoformeja, joilla on erilainen määrä IQ-motiiveja. Tärkein ASPM-transkripti sisältää 81 IQ-domeenia, joista suurin osa on järjestetty korkeamman järjestyksen toistorakenteeksi (HOR). Toisessa huomattavassa splikoituneessa muodossa on kehyksen sisäinen poisto eksonista 18, ja se koodaa 14 IQ-domeenia, jotka eivät ole järjestäytyneet HOR-rakenteeseen. Tämä muunnos on konservoitunut hiirissä. Havaittiin myös muita splikoituneita variantteja, joista puuttuvat sekä CH-domeenit että osa IQ-motiiveista, mikä viittaa sellaisten isomuotojen olemassaoloon, joilla on mahdollisesti erilaiset toiminnot. Selvittääksemme ihmisen ASPM:n biokemiallista toimintaa kehitimme peptidispesifisiä vasta-aineita ASPM:n N- ja C-terminaalia vastaan. Viljellyistä ihmis- ja hiirisoluista peräisin olevien proteiinien western-analyysissä vasta-aineet havaitsivat kaistoja, joiden liikkuvuudet vastasivat ennustettuja ASPM-isoformeja. Viljeltyjen ihmissolujen immunovärjäys vasta-aineilla osoitti, että ASPM paikallistuu karan napoihin mitoosin aikana. Tämä havainto viittaa siihen, että MCPH on seurausta ASPM:n mutaatioiden aiheuttamasta heikentyneestä mitoottisen karan säätelystä kortikaalisissa esiasteissa.

Jätä kommentti