Na current in membrane blebs: implications for channel mobility and patch clamp recording

Kun irrallisiin patch clamp -pipetteihin kohdistettiin imua, kun tallennettiin entsymaattisesti dissosioituneista lihassäikeistä, pipettien sisälle muodostui isoja membraanihaarakkeita. Aloitimme tutkimuksen näistä imun aiheuttamista läpilyönneistä, koska läpilyönneissä olevat ionikanavat hankaloittaisivat tai mahdollisesti mitätöisivät kalvon virrantiheyden mittaukset löysällä patch-jännitepuristimella. Na-kanavien vähäinen lateraalinen liikkuvuus (Stühmer ja Almers, 1982) ja jyrkät gradientit päätylevyssä ja jänteessä (Caldwell ym., 1986) merkitsevät Na-kanavien tiukkaa sitoutumista sytoskeletaalielementteihin ja saivat meidät odottamaan, että Na-kanavia olisi vain vähän tai ei lainkaan rakkuloissa. Läpän muodostuminen johti kalvon kapasitanssin kasvuun, kuten oli odotettavissa kalvon pinta-alan kasvusta. Läpän muodostuminen lisäsi myös Na-virtaa, mikä osoittaa, että läpät sisälsivät Na-kanavia. Jos oletetaan, että lisääntynyt kapasitanssi ja Na-virta johtuivat pipetin ulkopuolella olevasta kalvosta siirtyvistä lipideistä ja Na-kanavista, läpän poistamisen pipetistä odotettiin palauttavan kapasitanssin ja Na-virran alkuperäisiin arvoihinsa. Kapasitanssi palasi alkuperäiseen arvoonsa, mutta Na-virta oli odotettua pienempi. Na-virran väheneminen selittyy Na-kanavien siirtymisellä laastarikalvosta läpipainoputkeen. Läpän ja laastarin Na-virran normalisointi niiden kapasitansseihin osoitti, että läpän kalvon Na-kanavatiheys oli lähes 50 % normaalin pintakalvon Na-kanavatiheydestä. Näin ollen bleb-kalvo ei ole vailla proteiineja eikä täysin edustava normaalin pintakalvon kannalta, josta se on syntynyt. Se sisältää runsaasti kalvoripidejä ja on suhteellisen proteiiniköyhä. Tästä voidaan tehdä kaksi johtopäätöstä.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Jätä kommentti