Catégorie inhibiteur de bêta-lactamase.
Le clavulanate de potassium contient l’équivalent de pas moins de 75,5 % et pas plus de 92,0 % de C8H9NO5, calculé sur la base anhydre.
Emballage et stockage Le clavulanate de potassium doit être conservé dans des récipients hermétiquement fermés et stockés à une température comprise entre 2º et 8º.
Etiquetage L’étiquette du récipient indique (1) les conditions de stockage ; (2) le grade parentéral ou non parentéral.
Identification
A. Le chromatogramme de la préparation de l’essai obtenu comme indiqué dans l’essai présente un pic principal pour l’acide clavulanique, dont le temps de rétention correspond à celui présenté dans le chromatogramme de la préparation standard obtenue comme indiqué dans l’essai.
B. Il donne les réactions caractéristiques des sels de potassium (appendice 5.1).
pH 5,5 à 8,0, dans une solution à 1,0 pour cent p/v (appendice 4.11).
Eau Pas plus de 1,5 pour cent p/p (méthode Karl Fischer, appendice 4.12).
Limite du clavam-2-carboxylate de potassium Pas plus de 0,01 pour cent. Effectuer le dosage comme décrit dans la « Chromatographie liquide à haute pression » (annexe 3.5).
Phase mobile Préparer du dihydrogénophosphate de sodium 0,1 M, ajuster avec de l’acide phosphorique à un pH de 4,0±0,1, et filtrer à travers un filtre à membrane de 0,5 μm ou de porosité plus fine. Procéder à des ajustements si nécessaire. Solution étalon Dissoudre le Clavam-2-Carboxylate Potassium RS dans de l’eau pour obtenir une solution ayant une concentration connue d’environ 40 μg par ml.
Solution d’essai Transférer environ 100 mg de Clavulanate Potassium, pesés avec précision, dans une fiole jaugée de 10 ml, dissoudre dans et diluer avec de l’eau au volume, et mélanger.
Solution de résolution Dissoudre une quantité appropriée de clavulanate de potassium dans la solution standard pour obtenir une solution contenant environ 1 mg de clavulanate de potassium et 30 μg de clavam-2-carboxylate de potassium par ml.
Système chromatographique La procédure chromatographique peut être réalisée en utilisant (a) une colonne en acier inoxydable (30 cm × 4 mm) remplie d’octadécylsilane chimiquement lié à des microparticules poreuses de silice ou de céramique (3 à 10 μm) (b) une phase mobile à un débit de 0,5 ml par minute, et (c) un photomètre ultraviolet réglé à 210 nm.
Pour déterminer l’adéquation du système chromatographique, chromatographier la solution standard, et enregistrer les réponses des pics comme indiqué sous Procédure : le facteur de symétrie n’est pas supérieur à 1,5 et l’écart-type relatif pour les injections répétées n’est pas supérieur à 2,0 %. Chromatographe Solution de résolution, et enregistrer les réponses des pics comme indiqué sous Procédure : le facteur de résolution entre les pics de l’acide clavam-2-carboxylique et de l’acide clavulanique n’est pas inférieur à 1,0.
Procédure Injecter séparément des volumes égaux (environ 20 μl) de solution standard et de solution de test dans le chromatographe, enregistrer les chromatogrammes, et mesurer les réponses des principaux pics. Les temps de rétention relatifs sont d’environ 0,7 pour l’acide clavam-2-carboxylique et 1,0 pour l’acide clavulanique. Calculer le pourcentage de clavam-2-carboxylate de potassium
Limite de méthanol et de tert-butylamine Pas plus de 0,1 pour cent p/p de méthanol ou pas plus de 0,2 pour cent p/p de tert-butylamine. Effectuer le dosage comme décrit dans la « chromatographie en phase gazeuse » (annexe 3.4).
Solution mère Dans une fiole jaugée de 100 ml contenant 50,0 ml d’hydroxyde de sodium 3 M, ajouter environ 6 ml de méthanol et 12 ml de tert-butylamine, tous deux pesés avec précision, diluer avec de l’hydroxyde de sodium 3 M jusqu’au
volume, et mélanger. Transférer 10,0 ml de cette solution mère dans une deuxième fiole jaugée de 100 ml, diluer avec de l’hydroxyde de sodium 3 M jusqu’au volume, et mélanger. Transférer 10,0 ml de cette solution dans une troisième fiole jaugée de 100 ml, diluer au volume avec de l’hydroxyde de sodium 3 M et mélanger. Transférer 7,0 ml de cette solution dans une quatrième fiole jaugée de 100 ml, ajouter 3,0 ml d’hydroxyde de sodium 3 M, diluer au volume avec de la 4-méthyl-2-pentanone et mélanger. Laisser les phases se séparer et utiliser la couche claire de méthylisobutylcétone comme solution étalon. Cette solution contient environ 36,6 μg de méthanol et 63,8 μg de tertbutylamine par ml. Utiliser cette solution dans les 5 heures.
Solution de test Transférer environ 3 g de Clavulanate de potassium, pesés avec précision, dans une fiole jaugée de 100 ml, ajouter 10,0 ml d’hydroxyde de sodium 3 M et agiter jusqu’à dissolution. Laisser refroidir au bain-marie froid, diluer avec de la 4-méthyl-2-pentanone jusqu’au volume, boucher la fiole et agiter vigoureusement pendant 3 minutes, en ventilant de temps en temps. Laisser les phases se séparer, et utiliser la couche claire de méthyl isobutyl cétone comme solution de test. Utiliser cette solution dans les 5 heures.
Système chromatographique La procédure chromatographique peut être réalisée en utilisant (a) une colonne de verre (30 m × 0,32 mm) revêtue d’une phase stationnaire d’huile diméthylpolysiloxane et est maintenue à 40º, puis programmée pour augmenter à un taux de 55º par minute jusqu’à 200º, et maintenue à cette température pendant 4 minutes, (b) l’orifice d’injection et le bloc détecteur sont maintenus à 150º, (c) de l’azote comme gaz porteur, et (d) un détecteur à ionisation de flamme. Pour déterminer l’adéquation du système chromatographique, chromatographier la solution standard et enregistrer les réponses des pics de méthanol, de tert-butylamine et de méthylisobutylcétone comme indiqué dans la procédure : le facteur de symétrie n’est pas supérieur à 1.6 pour les pics de méthanol et de tert-butylamine ; l’efficacité de la colonne n’est pas inférieure à 25 000 plateaux théoriques ; le facteur de résolution entre le pic de méthanol et le pic de tert-butylamine n’est pas inférieur à 20 et entre le pic de tert-butylamine et le pic de 4-méthyl-2-pentanone n’est pas inférieur à 10 ; et l’écart-type relatif pour les injections répétées n’est pas supérieur à 10 %.
Procédure Injectez séparément des volumes égaux (environ 1 μl) de solution étalon et de solution à tester dans le chromatographe, enregistrez les chromatogrammes et mesurez les surfaces des réponses des pics du méthanol et de la tert-butylamine.
Calcul Calculez les pourcentages de méthanol et de tert-butylamine dans le clavulanate de potassium.
Pureté chromatographique Effectuez la détermination comme décrit dans la « chromatographie liquide à haute pression » (annexe 3.5).
Solution A Préparer une solution de dihydrogénophosphate de sodium 0,05 M, ajuster avec de l’acide phosphorique à un pH de 4,0±0,1, et filtrer à travers un filtre de 0,5-μm ou de porosité plus fine.
Solution B Préparer un mélange de volumes égaux de solution A et de méthanol.
Phase mobile Utiliser des mélanges variables de solution A et de solution B comme indiqué pour le système chromatographique. Faire des ajustements à l’une ou l’autre des solutions si nécessaire.
Solution standard Préparer une solution de Clavulanate Lithium RS dans la solution A ayant une concentration connue d’environ 0,1 mg par ml.
Solution d’essai Préparer une solution de Clavulanate Potassium dans la solution A contenant 10.0 mg par ml.
Solution de résolution Préparer une solution de Clavulanate Lithium RS et d’amoxicilline dans la solution A contenant 0,1 mg de chaque par ml.
Système chromatographique La procédure chromatographique peut être réalisée en utilisant (a) une colonne en acier inoxydable (10 cm × 4.6 mm) garnie d’octadécylsilane chimiquement lié à des microparticules poreuses de silice ou de céramique (3 à 10 μm) et est maintenue à une température constante d’environ 40º, (b) une phase mobile à un débit d’environ 1 ml par minute, et (c) un photomètre ultraviolet réglé à 230 nm.
Le système est programmé pour fournir une phase mobile constituée de mélanges variables de solution A et de solution B. Le système est équilibré pendant 15 minutes avec 100 pour cent de solution A, et maintenu à cette composition pendant 4 minutes après l’injection de la solution à tester, après quoi la proportion de solution B est augmentée linéairement de 0 à 50 pour cent sur une période de 11 minutes. Le système est maintenu dans cette composition pendant 3 minutes, puis on passe à la solution A à 100 % pendant 6 minutes. Pour déterminer l’adéquation du système chromatographique, chromatographier la solution de résolution et enregistrer les réponses des pics comme indiqué dans la procédure : les temps de rétention relatifs sont d’environ 2,5 pour l’amoxicilline et 1,0 pour l’acide clavulanique ; le facteur de symétrie pour le pic de l’acide clavulanique n’est pas supérieur à 2,0 ; l’efficacité de la colonne déterminée à partir du pic de l’acide clavulanique n’est pas inférieure à 2000 plaques théoriques ; et le facteur de résolution entre le pic de l’acide clavulanique et le pic de l’amoxicilline n’est pas inférieur à 13. Chromatographier la solution standard, et enregistrer les réponses aux pics comme indiqué pour Procédure : l’écart-type relatif pour les injections répétées n’est pas supérieur à 2 %.
Procédure Injecter séparément des volumes égaux (environ 20 μl) de solution standard et de solution de test dans le chromatographe, enregistrer les chromatogrammes, et mesurer les réponses aux pics.
Calcul Calculer le pourcentage, en termes d’équivalent de clavulanate de potassium, de chaque impureté dans le clavulanate de potassium pris par l’expression :
10(237.3/205.1)(C)(ri/rS),
dans laquelle 237,3 est le poids moléculaire du clavulanate de potassium ; 205.1 est le poids moléculaire du clavulanate lithium ; C est la concentration, en mg par ml, de Clavulanate Potassium RS dans la solution standard ; ri est la réponse du pic d’une impureté individuelle dans le chromatogramme obtenu à partir de la solution de test ; et rS est la réponse du pic d’acide clavulanique dans le chromatogramme obtenu à partir de la solution standard. La somme de tous les pics d’impureté n’est pas supérieure à 2 pour cent.
Dosage Effectuer le dosage comme décrit dans la « Chromatographie liquide à haute pression » (Annexe 3.5).
pH 4,4 Tampon de phosphate de sodium Dissoudre 7.8 g de dihydrogénophosphate de sodium dans 900 ml d’eau, ajuster avec de l’acide phosphorique ou de l’hydroxyde de sodium 10 M pour obtenir un pH de 4,4±0,1, diluer avec de l’eau pour obtenir 1000 ml et mélanger.
Phase mobile Préparer un mélange approprié de 95 volumes de tampon de phosphate de sodium de pH 4,4 et de 5 volumes de méthanol. Effectuer des ajustements si nécessaire.
Préparation standard Dissoudre une quantité exactement pesée de Clavulanate Lithium RS dans de l’eau pour obtenir une solution ayant une concentration connue d’environ 250 μg par ml.
Préparation de l’essai Transférer environ 50 mg de clavulanate de potassium, pesés avec précision, dans une fiole jaugée de 200 ml, dissoudre dans et diluer avec de l’eau au volume, et mélanger.
Solution de résolution Dissoudre une quantité appropriée d’amoxicilline dans la préparation standard pour obtenir une solution contenant environ 0,5 mg d’amoxicilline et 250 μg de clavulanate de lithium par ml.
Système chromatographique La procédure chromatographique peut être réalisée en utilisant (a) une colonne en acier inoxydable (30 cm × 4 mm) garnie d’octadécylsilane chimiquement lié à des microparticules poreuses de silice ou de céramique (3 à 10 μm), (b) une phase mobile à un débit d’environ 2 ml par minute, et (c) un photomètre ultraviolet réglé à 220 nm.
Pour déterminer l’adéquation du système chromatographique, chromatographe Solution de résolution, et enregistrement des réponses des pics comme indiqué sous Procédure : le facteur de résolution entre les pics d’amoxicilline et d’acide clavulanique n’est pas inférieur à 3,5 et les temps de rétention relatifs sont d’environ 0,5 pour l’acide clavulanique et 1,0 pour l’amoxicilline. Chromatographe Préparation standard, et enregistrer les réponses des pics comme indiqué sous Procédure : le facteur de symétrie pour le pic de l’acide clavulanique n’est pas supérieur à 1,5 et l’écart-type relatif pour les injections répétées n’est pas supérieur à 2,0 pour cent.
Procédure Injecter séparément des volumes égaux (environ 20 μl) de préparation standard et de préparation d’essai dans le chromatographe, enregistrer les chromatogrammes et mesurer les réponses pour les pics principaux.
Calcul Calculer la teneur en C8H9NO5 dans le clavulanate de potassium pris, en utilisant la teneur déclarée en C8H9NO5 dans le clavulanate de lithium RS.
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