Les mutants met sont auxotrophes Met, c’est-à-dire qu’ils sont incapables de se développer dans des milieux qui ne contiennent pas de Met. Les auxotrophes sont des micro-organismes qui sont incapables de synthétiser un nutriment essentiel en raison d’une mutation génétique. De nombreuses souches de laboratoire sont porteuses de multiples mutations qui interfèrent avec la synthèse de nutriments essentiels. Par exemple, comme la souche BY4742 porte des mutations dans les gènes HIS3, LEU2, LYS2 et URA3, elle ne peut se développer que dans des milieux contenant de l’histidine, de la leucine, de la lysine et de l’uracile. Les souches auxotrophes ont de nombreuses utilisations en génétique. Les chercheurs utilisent souvent les souches auxotrophes comme hôtes pour la transformation des plasmides (chapitre 12). Les plasmides utilisés pour la transformation portent des allèles fonctionnels d’un gène défectueux dans la souche hôte, ce qui permet de sélectionner les transformants par leur capacité à se développer sur des milieux dépourvus du nutriment essentiel.
Les milieux synthétiques sont un outil essentiel pour la culture et l’étude des auxotrophes, car tous les composants sont définis. Les chercheurs sur les levures ont développé une variété de formulations différentes pour les milieux synthétiques. Tous les milieux synthétiques contiennent une source de carbone (généralement du D-glucose), une source d’azote et des vitamines et minéraux essentiels. Les vitamines et les minéraux sont généralement achetés
dans une formulation connue sous le nom de base azotée de levure (YNB). Les suppléments ajoutés aux milieux synthétiques peuvent être adaptés pour favoriser ou empêcher la croissance de génotypes particuliers. Dans ce cours, nous utiliserons le milieu Yeast Complete (YC) qui favorise la croissance de la plupart des souches de S. cerevisia. Le taux de croissance des souches de type sauvage dans YC est un peu plus lent que celui des milieux riches comme YPD, mais les souches sont viables pendant de longues périodes. Le tableau de la page suivante montre la composition de YC, qui comprend un riche apport d’acides aminés et de bases nucléotidiques. En plus du milieu YC complet, nous utiliserons également des milieux sélectifs dans lesquels certains composants ont été omis. Par exemple, dans ce laboratoire, nous utiliserons le milieu YC-Met « drop-out », qui contient tous les composants YC du tableau suivant, sauf la méthionine.
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