Autoradiographie d’un Southern Blot
L’autoradiographie est une classe de techniques dans lesquelles les positions du matériel biologique marqué par des radio-isotopes font un autoradiogramme (« auto-image »). Les radio-isotopes tels que le 14C, le 32P, le 35S émettent des radiations qui exposent le film photographique ou radiographique. La substitution du 32P dans le squelette de l’ADN, ou du 35S dans les acides aminés soufrés permet de détecter les molécules marquées..
Un filtre Southern Blot est placé à l’intérieur d’une boîte-case étanche à la lumière (à gauche) et recouvert d’une feuille de film radiographique. La cassette est fermée et laissée pendant plusieurs heures à plusieurs jours. L’ADN marqué au radio-isotope expose le film qui, une fois développé, présente un motif de bandes noires indiquant la position de l’ADN marqué dans le buvard. Des marques d’alignement dans trois des quatre coins sont faites avec une encre spéciale qui expose également le film. Le buvard peut être aligné avec le film à l’aide des trois marques d’index (avec les marques d’index, un seul alignement est possible). Dans certaines expériences, l’alignement peut être utilisé pour localiser une bande d’ADN particulière sur le buvard et la découper, afin de récupérer l’ADN pour d’autres expériences.