Courant Na dans les blebs membranaires : implications pour la mobilité des canaux et l’enregistrement par patch clamp

Lorsque la succion a été appliquée aux pipettes de patch clamp libres pendant l’enregistrement à partir de fibres musculaires dissociées par voie enzymatique, de grands blebs membranaires se sont formés à l’intérieur des pipettes. Nous avons initié une étude de ces bavures induites par la succion parce que les canaux ioniques dans les bavures compliqueraient ou invalideraient peut-être les mesures de la densité de courant membranaire par pince à patch libre. La faible mobilité latérale (Stühmer et Almers, 1982) et les gradients abrupts des canaux Na au niveau de la plaque terminale et du tendon (Caldwell et al., 1986) impliquent une liaison étroite des canaux Na aux éléments du cytosquelette et nous ont amenés à nous attendre à peu de canaux Na, voire aucun, dans les bulles. La formation de blebs a produit une augmentation de la capacitance de la membrane, comme prévu par l’augmentation de la surface de la membrane. La formation de blebs a également augmenté le courant Na, indiquant que les blebs contenaient des canaux Na. En supposant que l’augmentation de la capacité et du courant Na était due au déplacement des lipides et des canaux Na de la membrane à l’extérieur de la pipette, l’éjection de la bulle de la pipette devait ramener la capacité et le courant Na à leurs valeurs d’origine. La capacité est effectivement revenue à sa valeur d’origine, mais le courant Na était plus faible que prévu. La diminution du courant Na s’explique par le déplacement des canaux Na de la membrane du patch vers le bleb. La normalisation du courant Na de la bulle et du patch à leurs capacitances respectives a révélé que la membrane de la bulle avait une densité de canaux Na de près de 50 % de celle de la membrane de surface normale. Ainsi, la membrane de la bulle n’est ni dépourvue de protéines ni vraiment représentative de la membrane de surface normale dont elle est issue. Elle est enrichie en lipides membranaires et est relativement pauvre en protéines. Deux conclusions peuvent être tirées. (RÉSUMÉ TRONCÉ À 250 MOTS)

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