Discussion
Une variété de techniques de bloc cellulaire a été utilisée depuis plus d’un siècle. L’utilisation de blocs cellulaires a été largement préconisée dans le bilan diagnostique des patients présentant des masses accessibles à la FNA, car ils fournissent des informations architecturales diagnostiques qui complètent les frottis de FNA.
Dans cette étude, le frottis de FNA coloré par Pap était la meilleure méthode pour les diagnostics de routine en raison de la préservation supérieure des caractéristiques nucléaires et cytoplasmiques, tandis que la technique du bloc cellulaire était plus adaptée aux analyses immunocytochimiques. Nos résultats suggèrent que les échantillons de blocs cellulaires sont mieux utilisés en complément de l’ICC et non pour les diagnostics cytologiques primaires. La dégénérescence des cellules dans les échantillons de blocs cellulaires peut être attribuée à un retard dans l’immersion de l’échantillon de bloc cellulaire dans le fixateur immédiatement après le prélèvement et à la variation de la technique FNA parmi le personnel. Cette variation de la technique peut avoir contribué au succès ou à l’échec de l’obtention d’échantillons de blocs cellulaires adéquats qui dépendent largement de l’habileté de l’aspirateur et de la cellularité élevée de l’aspirat.
En raison du délai de préfixation de nombreux échantillons de blocs cellulaires, une préservation sous-optimale de la cellularité (23/47), de la morphologie (41/47) et de l’architecture (28/47) a été observée au début de l’étude. Par conséquent, il y avait une faible concordance et une différence statistiquement significative entre les méthodes dans l’évaluation de la cellularité (κ – statistique = -0,0022 ; P 0,0006), de la préservation morphologique (κ – statistique = -0,02 ; P 0,00) et de la préservation architecturale (κ – statistique = 0,00 ; P 0,00). Aucun échantillon FNA (0/47) n’a obtenu un score nul pour la cellularité, mais 8,5 % (4/47) des échantillons de blocs cellulaires étaient acellulaires. Parmi ces échantillons, 4 % (2/47) ont été obtenus en rinçant l’aiguille et l’embout de la seringue et 4 % ont été obtenus en effectuant une seule aspiration dédiée à l’échantillon de bloc cellulaire. Une faible cellularité (score 1) a été obtenue pour 40% (19/47) des échantillons de blocs cellulaires alors que celle des échantillons FNA n’était que de 11% (5/47). Il convient également de noter qu’un plus grand nombre (96%) d’échantillons FNA (45/47) ont affiché un score plus élevé (score 2 et 3) pour la cellularité que les échantillons de blocs cellulaires, 57% (27/47). Tous les échantillons FNA (47/47) présentaient une préservation architecturale, contre seulement 47 % (22/47) des échantillons de blocs cellulaires. Dans la majorité des échantillons de blocs cellulaires (53%), la préservation architecturale était absente. Néanmoins, il a été décidé de continuer à utiliser le fixateur Formal-Fixx puisque le reste des échantillons (24/47, 6/47 et 19/47 respectivement) présentait une préservation optimale illustrée par des scores de classement plus élevés. Hanley et al. ont déclaré que la préservation de l’antigénécité des cellules tumorales est essentielle pour des analyses immunocytochimiques précises et que l’utilisation d’un fixateur idéal et de paramètres de traitement des tissus optimaux est cruciale à cet égard. Puisqu’une préservation optimale a été observée dans le reste des échantillons de blocs cellulaires, le fixateur et le programme de traitement des tissus utilisés ont été jugés adéquats. La préservation sous-optimale observée pourrait être due au délai de préfixation.
Dans notre milieu, les FNA sont principalement réalisés par des registraires en radiologie et en pathologie dont l’expérience et les compétences varient. Par conséquent, le matériel pour le bloc cellulaire était généralement aspiré après 3 ou 4 aspirations pour le frottis FNA conventionnel qui était prioritaire. Cela peut avoir contribué à un spécimen plus traumatisé et mal conservé. Dans de nombreux cas (20/47), une passe dédiée aux échantillons du bloc cellulaire n’a pas été effectuée. La seringue contenant l’échantillon FNA résiduel a simplement été rincée dans la solution fixatrice du bloc cellulaire. Dans ces cas, 65% (13/20) présentaient une cellularité sous-optimale (score 0 et 1). Pour 30/47 échantillons de blocs cellulaires, une aiguille d’aspiration dédiée a été placée directement dans le flacon contenant le fixateur Formal-Fixx de Shandon et 60% (18/30) ont montré une cellularité adéquate (score 2 et 3). Cela démontre qu’une aspiration à l’aiguille dédiée au bloc cellulaire améliore le rendement.
La déduction tirée de Bardi et Schwartz indique que l’état d’esprit des patients et des aspirateurs est d’une importance égale. Certains patients n’ont pas consenti à une aspiration supplémentaire par aiguille pour l’échantillon de bloc cellulaire, tandis que de nombreux aspirateurs étaient réticents à effectuer des aspirations supplémentaires par aiguille malgré le consentement éclairé des patients. Cette réticence était due au fait que le patient ne supportait pas la procédure, au risque de provoquer un pneumothorax chez les patients subissant une FNA pulmonaire, au fait que la masse ne se prêtait pas à la FNA, à des contraintes de temps, à l’inexpérience ou au simple fait de ne pas vouloir le faire. Bien que cela ne soit pas statistiquement évident, les échantillons recueillis pour la technique du bloc cellulaire peuvent avoir été désavantagés par le fait qu’ils n’ont pas reçu une aspiration dédiée. Tout ce qui précède pourrait avoir contribué à la faible cellularité, à la préservation morphologique et architecturale des blocs cellulaires et à une mauvaise concordance entre les deux méthodes de préparation des échantillons.
Il y avait une mauvaise concordance dans l’immunomarquage CK7 qui était le seul test qui affichait une différence statistiquement significative (P 0,02) entre les méthodes. La CK7 a été réalisée sur 44 échantillons. Parmi ceux-ci, 34% (15/44) étaient négatifs dans l’échantillon de bloc cellulaire et 13,6% (6/44) dans les échantillons FNA. Dans l’évaluation de la coloration de fond (BG) / non spécifique dans les immunomarquages, une différence statistiquement significative de cette discordance a été obtenue pour les immunomarquages de la CK 7 (K 0,03 ; P-value 0,0001), de la CK20 (K 0,01 ; P-value 0,00), de la TTF1 (K 0,00 ; P-value 0,03) et de la synaptophysine (K 0,15 ; P-value 0,03). Dans tous les cas, les échantillons de blocs cellulaires étaient plus nombreux à ne présenter aucune coloration de fond (score 0) que les échantillons FNA. La coloration aberrante non spécifique n’a pas été observée dans les contrôles négatifs des blocs cellulaires correspondants et dans les immunomarquages AE 1/3 appariés. Une explication possible de ce phénomène est que tous les antigènes ne sont pas sensibles à la dégradation ou à la diffusion anoxique, tout comme tous les antigènes ne sont pas également affectés par la fixation. Les échantillons de FNA les plus affectés par la coloration de fond et la coloration anormale étaient certains échantillons de FNA de foie, les échantillons contenant des débris protéiques et les échantillons principalement nécrotiques ou très épais, ce qui indique que le problème était intrinsèque. Kung et al. ont fait une observation similaire en ce qui concerne une intensité de coloration plus forte, l’absence de coloration non spécifique et l’absence de coloration aberrante dans les échantillons de blocs cellulaires, en particulier avec les colorations de cytokératine.
Des résultats discordants ont été obtenus pour un échantillon- un FNA de foie. L’immunocytochimie réalisée sur ce frottis a montré une positivité des cellules tumorales pour CK7 et la synaptophysine alors que CK20 était négatif. Ce profil de cytokératine est observé dans 56% des carcinomes neuroendocrines du poumon. Le même panel de tests effectués sur l’échantillon du bloc cellulaire correspondant était négatif. Bien que les 3 tests aient été répétés, les résultats sont restés inchangés. Une explication possible pourrait être une préservation sous-optimale de l’antigénicité des cellules tumorales dans cet échantillon qui a été en quelque sorte rendu plus sensible que les autres.
Les recherches futures dans ce département bénéficieraient de l’exploration de l’utilisation du formol tamponné neutre (NBF) à 10% comme fixateur de choix pour préparer les échantillons de blocs cellulaires pour l’immunohistochimie (IHC) avec une diminution du délai entre le prélèvement de l’échantillon et la fixation. Un comité ad hoc sur la normalisation de l’immunohistochimie, affilié au Collège des pathologistes américains, a découragé l’utilisation de fixateurs sans formol ou de méthodes de fixation alternatives. Ceci est dû au fait que les données de performance du test IHC utilisant d’autres fixateurs sont limitées et que l’extrapolation à partir des données existantes n’est pas fiable. Axe et al. ont produit des blocs cellulaires à partir de FNA du foie qui ont été fixés dans du NBF à 10% avec une préservation optimale de la cellularité et une IHC réussie permettant ainsi la sous-classification de la tumeur.
Avec l’utilisation du système de préparation de blocs cellulaires Cytoblock de Shandon, il a été possible de capturer de petits groupes de cellules. Une technique améliorée de préparation de blocs cellulaires et de capture de cellules a été conçue par Varsegi et Shidham qui pourrait être bénéfique en l’incorporant à la méthode actuelle. L’utilisation de la technique de Varsegi augmente les chances de capturer des cellules dispersées individuellement avec l’utilisation d’Histogel (Thermo Shandon), évitant ainsi à l’histotechnologiste de couper trop profondément dans le bloc et de risquer de manquer la zone avec les cellules d’intérêt. Bien que cela ne soit pas statistiquement évident, les échantillons recueillis pour la technique du bloc cellulaire peuvent avoir été désavantagés par le fait qu’ils n’ont pas reçu une aspiration initiale dédiée, ce qui peut avoir compromis la cellularité. A cet égard, l’obtention de matériel à partir de plusieurs aspirations d’aiguilles dédiées pour le bloc cellulaire devrait être explorée pour améliorer le rendement.
Le rôle de la préparation du bloc cellulaire dans la cytopathologie diagnostique est sans aucun doute d’une immense importance car il permet de multiples investigations spéciales et par conséquent un diagnostic cytologique plus raffiné. La méthodologie pourrait être améliorée en modifiant les techniques et en réduisant les limites posées dans cette étude, c’est-à-dire en explorant l’utilisation du formol tamponné neutre (NBF) à 10% comme fixateur de choix dans la préparation des échantillons de blocs cellulaires pour l’immunohistochimie (IHC), avec une diminution du temps écoulé entre la collecte des échantillons et la fixation et la standardisation de la technique FNA parmi le personnel. Les frottis directs FNA et les blocs cellulaires se complètent et nos résultats indiquent que les deux sont nécessaires dans l’établissement du diagnostic des patients ; le premier pour évaluer la morphologie, et le second pour obtenir des résultats optimaux en immunocytochimie. Dans des contextes où les ressources sont limitées, les implications financières de la réalisation de frottis conventionnels et de blocs cellulaires sur tout le matériel FNA justifient une évaluation plus approfondie.