Un chromatogramme est essentiellement la sortie d’un passage chromatographique. Il s’agit d’un fichier électronique ou d’une copie papier contenant les informations générées au cours de l’exécution de la chromatographie.
Il existe de nombreuses variations sur ce qui est indiqué sur un chromatogramme – en fonction des paramètres utilisés dans chaque laboratoire et de toute exigence réglementaire. A titre d’exemple, le minimum indiqué sur un passage GC d’un échantillon en cours de traitement pourrait être :
- Identification de l’échantillon (Produit, numéro de lot, numéro d’étape)
- Information sur l’échantillon (poids ou concentration de l’échantillon)
- Date et heure de l’injection
- Nom ou identification de l’analyste
- Identification de l’instrument et nom de la méthode analytique utilisée
- Nom de fichier et emplacement des données brutes générées pendant le passage
- Enregistrement graphique montrant les pics générés et la ligne de base, connu sous le nom de trace
- Tableau des résultats (contenant les données brutes et les données calculées)
De nos jours, c’est un processus très automatisé de générer un tableau de résultats, mais cela n’a pas toujours été aussi simple…
Papier carré et ciseaux
Avant que l’analyse des données et l’intégration numérique ne deviennent la norme – le papier millimétré et les ciseaux se trouvaient sur l’étagère de chaque analyste.
Un enregistreur graphique, relié au détecteur, enregistrait la trace directement sur du papier carré ou du papier millimétré en utilisant un stylo à encre. A partir de la trace, il y avait deux méthodes couramment utilisées pour calculer les résultats:
Compter les carrés:
L’analyste utilisait une règle et un stylo pour dessiner la meilleure forme de pic (triangle) et la meilleure ligne de base. Le nombre de carrés dans chaque triangle a ensuite été compté. Ce compte a ensuite été utilisé avec l’atténuation du détecteur et la composition de l’échantillon a été calculée.
Découpage et pesée:
Une ligne de base a été construite pour les pics qui ont été enregistrés. Les pics ont ensuite été découpés et pesés. L’aire du pic étant proportionnelle au poids, à condition que l’épaisseur et le taux d’humidité du papier soient uniformes. Des astuces comme la photocopie de la trace et l’agrandissement de la trace pouvaient être utilisées pour augmenter la précision.
Comme on peut l’imaginer, des pics qui se chevauchent et des échantillons contenant beaucoup de constituants différents pouvaient poser de sérieux problèmes à un analyste. Maintenant, les ordinateurs aident à réduire les erreurs.
Lire un chromatogramme
Bien que l’instrumentation moderne ait éliminé une grande partie des conjectures de l’époque du papier et des ciseaux, la capacité à lire et à interpréter un chromatogramme est tout aussi importante de nos jours.
La trace devrait toujours être vérifiée, car ce sera la première indication si quelque chose a mal tourné avec la chromatographie. Les vérifications simples comprennent :
- La ligne de base semble-t-elle correcte, plate et sans trop de bruit ?
- La forme des pics est-elle acceptable ? Pas trop d’asymétrie, belle et nette et à l’échelle
- Y a-t-il le bon nombre de pics ? Y a-t-il des pics supplémentaires ou manquants ?
- Les pics de référence et d’étalon interne sont-ils correctement identifiés, et les temps de rétention OK ?
Bien que les données soient toutes enregistrées et que les calculs soient effectués pour l’analyste, c’est à ce dernier de s’assurer qu’aucune erreur n’a été commise. Une discussion sur l’analyse des données dans les systèmes modernes se trouve dans cet article : Analyse automatisée des métriques d’instrumentation HPLC en accès libre.