6.3: Auxotrófok és szelektív közegek

A met mutánsok Met auxotrófok, ami azt jelenti, hogy nem képesek Met-et nem tartalmazó közegben növekedni. Az auxotrófok olyan mikroorganizmusok, amelyek egy génmutáció miatt nem képesek egy esszenciális tápanyagot szintetizálni. Sok laboratóriumi törzs több olyan mutációt hordoz, amelyek zavarják az esszenciális tápanyagok szintézisét. Például, mivel a BY4742 törzs mutációkat hordoz a HIS3, LEU2, LYS2 és URA3 génekben, a törzs csak hisztidint, leucint, lizint és uracilt tartalmazó táptalajon fog növekedni. Az auxotróf törzseket sokféleképpen használják a genetikában. A kutatók gyakran használják az auxotróf törzseket gazdaként plazmidtranszformációhoz (12. fejezet). A transzformációhoz használt plazmidok egy olyan gén funkcionális alléljait hordozzák, amely a gazdatörzsben hibás, így lehetővé válik a transzformánsok kiválasztása aszerint, hogy képesek-e az esszenciális tápanyagot nélkülöző táptalajon növekedni.

A szintetikus táptalajok alapvető eszközei az auxotrófok tenyésztésének és tanulmányozásának, mivel minden összetevőjük meghatározott. Az élesztőkutatók számos különböző összetételű szintetikus táptalajt fejlesztettek ki. Minden szintetikus táptalaj tartalmaz egy szénforrást (általában D-glükózt), egy nitrogénforrást, valamint alapvető vitaminokat és ásványi anyagokat. A vitaminokat és ásványi anyagokat általában élesztő nitrogénbázis (YNB) néven ismert készítményben vásárolják. A szintetikus táptalajokhoz hozzáadott kiegészítőket úgy lehet testre szabni, hogy támogassák vagy szelektálják az egyes genotípusok növekedését. Ebben a tanfolyamban Yeast Complete (YC) táptalajt fogunk használni, amely támogatja a legtöbb S. cerevisia törzs növekedését. A vad típusú törzsek növekedési sebessége YC-ben valamivel lassabb, mint az olyan gazdag táptalajokban, mint az YPD, de a törzsek hosszú ideig életképesek. A következő oldalon található táblázat mutatja az YC összetételét, amely gazdag aminosav- és nukleotidbázis-ellátottságot tartalmaz. A teljes YC táptalaj mellett olyan szelektív táptalajokat is használunk, amelyekből egyes komponenseket kihagytunk. Ebben a laborban például YC-Met “kieső” táptalajt fogunk használni, amely a metionin kivételével az alábbi táblázatban szereplő összes YC-komponenst tartalmazza.

Szólj hozzá!