huFcγRIII
huFcγRIII (CD16) ∼ 4 × 106 M-1 Ka értékkel (Kurlander és Batker, 1982) kötődik az IgG1-hez és IgG3-hoz, és makrofágokon, természetes ölősejteken (NK), neutrofileken, eozinofileken és néhány T-sejtben expresszálódik (Anderson, 1989). A huFcγRIII Mr értéke 50K és 70K között változik (Fleit és mtsai., 1982). NK és neutrofil sejtek lizátumainak immunprecipitációs vizsgálatai huFcγRIII-specifikus mAb-vel, majd deglikoziláció és SDS-PAGE segítségével különböző Mr értékű magfehérjéket mutattak ki a két sejttípusban (Lanier és mtsai., 1988). Későbbi cDNS-klónozási kísérletek kimutatták, hogy az NK-sejt a neutrofilekétől eltérő mRNS-t ír át (Scallon és mtsai., 1989; Ueda és mtsai., 1989; Ravetch és Perussia, 1989; Edberg és mtsai., 1989; Selvaraj és mtsai., 1989). Így legalább két gén kódolja a huFCγRIII-at: a huFcγRIII-1 a neutrofileken és a huFcγRIII-2 az NK-sejteken és makrofágokon.
huFcγRIII-1 az összes többi FcγR-rel ellentétben a neutrofil sejtmembránhoz rögzül egy GPI-kötésen keresztül, és a sejtmembránból egy foszfoinozitol-specifikus foszfolipáz C segítségével szabadulhat fel (Selvaraj et al., 1989; Edberg és mtsai., 1989; Ravetch és Perussia, 1989; Scallon és mtsai., 1989; Ueda és mtsai., 1989). A neutrofilek kemotaktikus peptiddel történő stimulálása formyl-Met-Leu-Phe formil-Met-Leu-Phe-vel a huFcγRIII-1 felszabadulását eredményezte a neutrofil membránból (Huizinga és mtsai., 1988). Hogy ez proteolitikus hasításnak vagy egy foszfolipáz C aktiválásának volt-e köszönhető, nem világos. A huFcγRIII-1 GPI-kapcsolódási doménjében egyetlen aminosav megváltoztatása azt eredményezi, hogy a fehérje egy rövid citoplazmatikus farokkal rendelkező transzmembrán doménnel rögzül (Kurosaki és Ravetch, 1989; Lanier és mtsai., 1989a).
A huFcγRII-hoz hasonlóan a huFcγRIII-1 esetében is két allotípus (NA1 és NA2) létezik. Ezek az allotípusos különbségek csecsemőknél autoimmun neutropeniát okozhatnak (Lalezari és mtsai., 1986). A neutrofileken két receptorformát (19 és 21 kDa) különböztettek meg deglikozilálás után, amelyet SDS-PAGE követett (Edberg és mtsai., 1989). A 19 és 21 kDa-os receptortípusok expressziós mintázata korrelált az NA1 és NA2 allotípusos marker expressziós mintázatával. Ezen allotípusok (NA1 és NA2) megkülönböztetése a CLB-GRAN11, illetve a GRM1 mAb-ok segítségével volt lehetséges (Huizinga et al, 1990a).
A legtöbb FcγR által közvetített neutrofil funkciót feltehetően a huFcγRII közvetíti, annak ellenére, hogy sokkal több huFcγRIII-1 hely van, 135 000 hely neutrofilonként (Fleit és mtsai., 1982), mint huFcγRII hely, ∼10 000 hely neutrofilonként (Anderson, 1989). Az anti-CE és anti-huFcγR mAb-k Fab fragmentumaiból álló heteroantitestekkel bevont csirke eritrociták ADCC-je mind a huFcγRII, mind a huFcγRIII neutrofileken keresztül közvetített (Graziano és mtsai., 1989a). A neutrofilek azonban nem tudtak elpusztítani egy anti-huFcγRIII hibridoma sejtvonalat. Újabb munkák bizonyították, hogy a huFcγRIII-1 keresztkötés után hidrolázok felszabadulását, de nem légzésrohamot képes kiváltani (Huizinga és mtsai., 1990b). Ez magyarázhatja a CE-k, de nem a hibridóma sejtek huFcγRIII-1 által közvetített, megfigyelt lízisét.
A huFcγRIII-1 nagy sűrűsége a neutrofileken arra szolgálhat, hogy az immunkomplexeket a sejtfelszínen összpontosítsa, ahol azok kölcsönhatásba léphetnek a huFcγRII-lal és kiválthatják azt. Valójában vizsgálatok (Looney és mtsai., 1986b; Tetteroo és mtsai., 1987) arra utalnak, hogy elsősorban a huFcγRIII vesz részt a neutrofilek IgG-vel bevont eritrocitákhoz való tapadásában. Hasonlóképpen, a huFcγRIII-1 nélkülözhetetlen volt a kis immunkomplexek neutrofilekhez való kötődéséhez, míg a huFcγRII csak gyengén fokozta ezt a kötődést (Huizinga és mtsai., 1989a). A huFcγRIII-1-nek ez az esszenciális kötődési szerepe azonban nem terjedt ki a nagyméretű immunkomplexekre, és a paroxizmális éjszakai hematuriás betegek, akiknél a huFcγRIII-1 szintje a normálisnak csak 10%-a volt, normális metabolikus választ adtak az IgG-latexre (Huizinga és mtsi., 1989a). Találtak egy szisztémás lupus erythematosusban (SLE) szenvedő beteget, aki nem expresszálta a huFcγRIII-1-et a neutrofileken, a huFcγRIII-1 gén valószínű deléciója miatt (Clark és mtsi., 1990). A beteg neutrofileknek csökkent volt a képessége az IgG-vel bevont eritrociták rozettázására, amint azt a neutrofilek működésének korábbi vizsgálatai is sugallták (Looney és mtsai., 1986b; Tetteroo és mtsai., 1987). Ez a beteg azonban nem mutatott szokatlan fogékonyságot a bakteriális fertőzésekre, és a többi GPI-hez kötött fehérje és a huFcγRII szintje normális volt. Nyolc másik SLE-vel diagnosztizált betegnél a huFcγRIII-1 szintje normális volt. HIV-fertőzött férfiaknál a neutrofilek jelentős százalékában (25%) negatív volt a huFcγRIII-1 expressziója, de a többi GPI-hez kötött fehérje és a huFcγRII szintje normális volt (Boros és mtsi., 1990b). A huFcγRIII-negatív szubpopuláció nagyobb volt az autoimmun deficiencia szindrómával (AIDS) diagnosztizált betegeknél és a HIV-fertőzött intravénás drogfogyasztóknál, mint a HIV-fertőzött homoszexuálisoknál és a nem fertőzött kontroll férfiaknál. A huFcγRIII-1 elvesztéséért felelős mechanizmust és a megváltozott expresszió fiziológiai következményeit még nem vizsgálták. A szérum huFcγRIII szintje a jelentések szerint változik az AIDS lefolyása során, a szérum huFcγRIII szintje kezdetben emelkedik, majd a betegség végső stádiumában csökken (Khayat és mtsai…, 1990).
a huFcγRIII-2 magfehérje Mr értéke valamivel nagyobb, mint a huFcγRIII-1-é (∼ 24K versus ∼ 20K), és egy I-es típusú membrán glikoprotein, egyetlen transzmembrán doménnel és citoplazmatikus doménnel (Unkeless, 1989a). huFcγRIII-2 a huFcγRIII makrofágokon és NK-sejteken megtalálható formája. Transzmembrán doménje nagymértékben homológ a moFcγRIIα és a raFc∈RI α-láncával, beleértve egy azonos nyolc aminosavból álló szakaszát.
huFcγRIII-2 az NK-sejteken keresztkötés után ADCC-t közvetít (Werfel és mtsai., 1989). A receptor immunkomplex keresztkötése az interleukin-2 receptor, az IFN-γ és a TNF-α transzkripcióját is indukálta, amelyek mind aktiválják az NK-sejtek aktivitását (Anegon és mtsai., 1988). Ezért a huFcγRIII-2 aktiválása az NK-sejteken amellett, hogy az NK-sejteken az ADCC kiváltójaként hat, az NK-sejtek Ig-független, természetes ölő aktivitását is erősíti. Az anti-LFA-1 (CD11a) antitesteknek az NK-sejtek huFcγRIII-2-mediált ADCC-jét gátló képessége arra utal, hogy ez az adhéziós receptor részt vesz az effektorsejt-célsejt appozícióban az NK-mediált ADCC során (Werfel és mtsai., 1989). Hasonlóképpen, monocitákban, de nem limfocitákban az LFA-1 blokkolása gátolta a huFcγRs keresztkötésén keresztül közvetített ADCC-t (Graziano és mtsai., 1989b).
Az NK sejtek kis alcsoportjai kevés vagy egyáltalán nem expresszálnak huFcγRIII-2-t (Lanier és mtsai., 1986). A huFcγRIII expressziójának szintje az NK-sejt vonal különböző fejlődési szakaszait jelezheti. Az alacsony szinten vagy nem huFcγRIII-2-t expresszáló NK-sejtek a rIL-2-re adott válaszként nagyobb mértékben szaporodnak (Nagler és mtsai., 1989). Az alacsony proliferatív képesség, a vérben való nagy abundancia és a magas ciotoxikus potenciál alapján a legérettebb stádiumot a bőségesen huFcγRIII-2-t expresszáló NK-sejtek alkotják.
Számos vizsgálat bizonyította, hogy a lépben lévő makrofágokon és a Kupffer-sejteken lévő huFcγRIII-2 a nagyméretű immunkomplexek clearance-éért felelős elsődleges receptor. Csimpánzokban a 3G8 anti-huFcγRIII mAb in vivo gátolta a minor vércsoport antigén ellen irányuló antitesttel bevont autológ eritrociták in vivo clearance-ját (Clarkson és mtsai., 1986b). A 3G8 mAb-t potenciális terápiás kezelésként tesztelték az immuntrombocita purpurában szenvedő egyéneknél, amely betegségben a betegek nagy mennyiségű trombocitaellenes antitestet választanak ki (Clarkson és mtsai., 1986a). Az egyik beteg kezelése a vérlemezkeszint drámai emelkedését eredményezte, amely 2 héten belül visszaállt a normális szintre. Sajnos egy második kezelés sokkal kevésbé drámai választ adott. Az egér mAb-vel szembeni érzékenyítés csökkentheti a hatékonyságát.
hufcγRIII a tenyésztett monocitákon biokémiailag nem különböztethető meg az NK-sejtekétől (Klaassen és mtsi., 1990). A jelentések ellentmondanak abban a kérdésben, hogy a huFc7RIII a makrofágok ADCC-t kiváltó molekulája. Az anti-huFcγRIII mAb, CLB-FcR-GRAN1 hozzáadása nem csökkentette a tenyésztett monociták lítikus aktivitását egy egér mAb különböző izotipikus kapcsolóváltozatainak (IgG1, IgG2a és IgG2b) 4 × 104 molekulával/erythrocyta szenzitizált eritrocitákkal vagy egy másik egér hibridoma sejtvonalból származó IgG3 azonos mennyiségével szemben (Klaassen és mtsi., 1990). Lépéseket tettünk annak biztosítására, hogy a kísérleteket a másik huFcγR maximális lítikus aktivitása alatt végezzük tenyésztett monocitákon, hogy a CLB-FcR-GRAN1 mAb általi gátlást ki tudjuk mutatni. Azonban a peritoneális makrofágok, még a friss monociták is egyértelműen képesek voltak elpusztítani egy anti-FcγRIII-at hordozó hibridoma-sejtvonalat (HC 3G8) (Graziano és mtsai., 1989b). Ez volt az első bizonyíték arra, hogy a huFcγRIII-2 funkcionálisan kimutatható a friss monocitákon. Az ölő képességben mutatkozó eltérés az egyes vizsgálatokban használt eltérő célsejteknek és mAb-knek tudható be.
A FcγR-ek súlyosbíthatják az FcγR-t hordozó sejtek HIV-fertőzését anti-HIV antitestek jelenlétében. A makrofágokon expresszálódó HuFcγRIII-2 közvetítette a makrofágok HIV-fertőzésének antitestfüggő fokozását (Homsy és mtsai., 1989). A huFcγRIII-2 ellen irányuló antitestek blokkolták ezt a hatást, míg az anti-huFcγRI vagy anti-huFcγRII antitestek nem. Azt a megfigyelést, hogy a HIV-1 fertőzés a CD4-gp120 kölcsönhatástól függetlenül is végbemehet, megerősíti az a megfigyelés, hogy a vírus által kódolt FcγR-t expresszáló citomegalovírussal fertőzött fibroblasztok HIV-1 immunkomplexekkel fertőzhetők, és ez a fertőzés IgG aggregátumokkal blokkolható (McKeating és mtsai., 1990).