Immunocitokémia az intraepiteliális neopláziában és az invazív rákban
A cervikális intraepiteliális neoplázia osztályozása, a citopatológusok olyan citomorfológiai kritériumokra támaszkodnak, mint a nukleáris hiperchromázia, a nukleáris atípia és a nukleocitoplazma arányok. Az osztályozásnak ez a formája nem képes megjósolni a CIN-léziók biológiai viselkedését. Óriási mennyiségű biológiai markert vagy helyettesítő végpont biomarkert fejlesztettek ki, amelyek nagymértékben alkalmazhatók a szövettani méhnyakszövetekre. Ezeket a markereket általában “nagyon ígéretesnek” mutatják be a méhnyakelváltozások regresszív vagy progresszív viselkedésének helyes előrejelzésében. A mindennapi gyakorlatban e markerek alkalmazhatósága meglehetősen kiábrándító. Mivel a legkorábbi megfigyelések szerint a CIN a méhnyak hámsejtjei proliferatív aktivitásának progresszív működési zavarával jár, a legtöbb kifejlesztett biológiai marker olyan fehérje, amely a sejtciklus szabályozási útvonalaiban játszik döntő szerepet. Ezeknek a biológiai markereknek a részletes áttekintését, különösen a méhnyak szövettanához felszerelve, az 1. fejezetben találjuk. A méhnyakcitológiában a biológiai markerek választéka történelmileg sokkal korlátozottabb, mivel a szűrés a Papanicolaou-festett kenetekkel történik, és általában nem áll rendelkezésre további vizsgálatokhoz szükséges maradékanyag. Ráadásul, ha a közvetlen nedves citológiai mintákon, például a folyékony alapú citológián végzett immuncitokémia sikeres akar lenni, enyhe, rövid alkoholos vagy acetonos fixálás szükséges. Ezt az enyhe fixálást csak magasan képzett és jól ellenőrzött laboratóriumokban lehet megfelelően elvégezni, hogy reprodukálható immuncitokémiai festési eredményeket kapjunk. Ez a probléma a szövettanban a szövetek robusztus rutinszerű formalinban történő rögzítése miatt nem jelentkezik.
Az egyes keratinokhoz kifejlesztett lánc-specifikus monoklonális antitestek (mAbs) lehetővé teszik a tartaléksejtek, az éretlen és érett laphámmetaplázia, valamint a normális ektocervikális laphám és endocervikális oszlopos hám, illetve a különböző típusú hámrendellenességek (CIN 1., 2. és 3. fokozat) immuncitokémiai megkülönböztetését.123,228-230
Az ugyanazon keratin-polipeptid különböző epitópjai ellen irányuló több monoklonális antitest alkalmazásával (pl. különböző mAb-k a keratin 18 ellen) lehetőség van a biológiai aktivitásból vagy neoplasztikus transzformációból eredő szerkezeti változások kimutatására. A laphámsejtes rák differenciálódási foka meghatározható a keratin 10 vagy 13 antitestek használatával. A keratin 10 a keratinizáció markere. Kifejeződhet a laphám felületesebb rétegeinek sejtjeiben, még akkor is, ha fénymikroszkóposan nem mutatható ki a keratinizáció jele.
A széles körben keresztreagáló mAb-k gyakorlatilag minden hámszövetben és primer és metasztatikus hámrákban, beleértve a különböző differenciáltsági fokú laphámrákokat és a kissejtes anaplasztikus karcinómákat is, pozitív reakciót adnak. A keratin 18 elleni antitestek többek között képesek felismerni az adenokarcinómákat, de általában nem reagálnak a laphámsejtes karcinómákkal.231 Az adenokarcinómák szinte mindig negatívak az 5, 10, 13 és 16-os keratinokra. A laphámsejtes karcinómák szinte mindig pozitívak az 5., 10. és 13. keratinra. A 16-os keratin expressziója a keratinizáló laphámsejtes karcinómákra korlátozódik. A keratin 7 mAb-k általában nem adtak festődési reakciót a (keratinizáló) laphámsejteken. Ez az antitest a méhnyak oszlopos sejtjeivel reagál.232
Moll és munkatársai kimutatták az 5, 7, 8, 17, 18 és 19 citokeratinok jelenlétét az éretlen laphámmetapláziában és a keratin expresszió megváltozott mintázatát az érett laphámban és az enyhe diszpláziában233 (8.125. ábra). Hasonló mintázatot találtak invazív karcinómában, mint érett laphámban.
Smedts és munkatársai kóros méhnyakhámban a 10, 11, 13 és 16-os citokeratinok szabálytalan eloszlását találták a CIN 3. fokozatában.234,235 A pozitivitás eloszlásának foltos mintázatát észlelték. A pozitivitás területei negatív területekkel váltakoztak. Nem tudták kimutatni a citokeratin-tartalom következetes és progresszív változását a normális hámtól a CIN 1. és 2. fokozatán keresztül. Megfigyeléseik arra utalnak, hogy hirtelen változás következett be a morfológiailag CIN 3. fokozatúként leírt elváltozás kialakulásakor. Az endocervikális csatorna invaginációiban lévő CIN 2-es fokozatú elváltozások mintázata megegyezett a csatorna felszínén lévő elváltozásokéval. A CIN 3. fokozatban a festődési mintázat hasonló volt az invazív laphámsejtes karcinómában talált mintázathoz. Puts és munkatársai keratinok ellenes anticitokeratin antitesteket használtak, és nem találtak minőségi különbségeket a festési reakciókban a különböző súlyossági fokú epithelialis elváltozások között.236 Változó számú Langerhans-sejtet találtak 32 diszpláziás elváltozásban, de a különböző súlyosságú elváltozások közötti eloszlásban nem találtak specifikus mintázatot.6 Feltételezték, hogy a Langerhans-sejtek számának különbségei a diszpláziás folyamatok, valamint a gazdaszervezet válaszának különbségeivel korrelálhatnak, és így potenciálisan a regresszióra vagy progresszióra való hajlamot jelezhetik.
Smedts és munkatársai a keratinok expresszióját vizsgálták a normál méhnyakhámban, a metaplasztikus hámban és a CIN 1, 2 és 3 fokozatában egy lánc-specifikus mAbs panel segítségével.237,238 Ez lehetővé tette a 4, 5, 7, 8, 10, 13, 14, 18 és 19 egyedi keratinok kimutatását egysejtes szinten. Az eredmények azt mutatták, hogy a tartaléksejtek éretlen laphámmetapláziává történő átalakulása során ez a hám az ektocervikális laphámra jellemző keratinokat szerzett, míg a tartaléksejtekre és az oszlopos sejtekre jellemző keratinok elvesztek. Ez a változás folytatódott az érett laphámmetapláziává történő további differenciálódás során. A premalignus transzformáció a laphámra jellemző keratinok részleges elvesztését és az egyszerű hámsejtekre atípusos keratinok megszerzését eredményezte.
Az intraepithelialis neoplázia 1-3. fokozatán keresztül a növekvő hámatípia során az egyszerű hámsejtekre jellemző keratinok megjelennek a diszpláziás elváltozásokban (8.126. ábra). A CIN 1. fokozatában az esetek körülbelül fele, a CIN 2. fokozatában (mérsékelt diszplázia) pedig egyharmada mutat némi szétszórt pozitivitást a 8-as és 18-as keratinok tekintetében, míg a 19-es keratin, amely az érett laphámhámban a bazális rétegeket festi, most polaritásvesztést mutat, és a diszpláziás hám teljes vastagságának egyre nagyobb részét festi meg, gyakran szabálytalan mintázatban.
Az érett laphámhoz képest a 4, 5, 13 és 14 keratinok expressziója csökkent, és a festődési mintázat változóvá vált (8.127. és 8.128. ábra). Ez azt jelezte, hogy a diszpláziás hám a rendellenesség súlyosságának előrehaladásával összefüggésben fokozatosan elveszítette laphámos keratin fenotípusát, és az egyszerű hám keratinjellemzőit szerezte meg.
Ezek a változások még nyilvánvalóbbak voltak a CIN 3. fokozatú esetekben; minden esetben a keratin 8 és 18 kifejeződése bőséges volt, a keratin 13 és 14 kifejeződése pedig csökkent, egyes területeken teljesen hiányzott. Ez hangsúlyozta az egyszerű hámra jellemző keratinmintázat fokozott kifejeződését a növekvő diszpláziás elváltozással.
A 8, 18 és 19 keratinokat a méhnyak laphámsejtes karcinómáiban és adenokarcinómákban is megtalálták. Ezeknek a keratinoknak a tartaléksejtekben való kifejeződése arra utalhat, hogy ezek a sejtek közös progenitorsejtek, kettős differenciálódási potenciállal, egyrészt a metaplázia fázisán keresztül laphámsejtes abnormalitássá, másrészt a differenciálódáson keresztül oszlopos sejt típusú abnormalitássá. A laphámsejt-típusú és oszlopsejt-típusú keratinok kettős expressziója az éretlen laphámmetapláziában ezt a hipotézist látszik alátámasztani.228,229
.