IgG tisztítása DEAE-szefaróz kromatográfiával

Abstract

Az IgG egy egyszerű, egylépéses ioncserélő kromatográfiás eljárással tisztítható szérumból. A módszer széles körben elterjedt, és azon az elven működik, hogy az IgG magasabb vagy bázikusabb izoelektromos ponttal rendelkezik, mint a legtöbb szérumfehérje. Ezért, ha a pH-t a legtöbb antitest izoelektromos pontja alatt tartjuk, az immunglobulinok nem kötődnek az anioncserélőhöz, és elválnak az oszlopmátrixhoz kötött szérumfehérjék többségétől. Az anioncserélő oszlopok nagy kapacitása lehetővé teszi az IgG nagymértékű tisztítását a szérumból. Az anioncserélő reaktív csoport, a dietilaminoetil (DEAE) kovalensen a Sepharose-hoz (pl. DEAE Sepharose CL-6B, Pharmacia, Uppsala, Svédország) kötve hasznos erre a célra. Előre megduzzadva és oszlopba pakolásra készen kapjuk, valamint robusztus és nagy kötési kapacitással rendelkezik. Ezenkívül viszonylag stabil az ionerősség és a pH változásával szemben. Más mátrixokat (pl. DEAE-cellulóz) szilárd anyagként szállítanak, és ezért előkészítést és kiegyenlítést igényelnek (1).

Szólj hozzá!