A kromatogram lényegében egy kromatográfiás futtatás kimenete. Ez egy elektronikus fájl vagy nyomtatott példány, amely a kromatográfiás futtatás során keletkezett információkat tartalmazza.
A kromatogramon megjelenő információknak számos különböző változata létezik – az egyes laboratóriumokban használt beállításoktól és az esetleges szabályozási követelményektől függően. Példaként a folyamat közbeni minta GC-futtatásán megjelenő minimális érték a következő lehet:
- Mintaazonosítás (Termék, tételszám, szakaszszám)
- Mintainformáció (a minta tömege vagy koncentrációja)
- Az injektálás dátuma és időpontja
- Az analitikus neve vagy azonosítója
- A műszer azonosítója és az alkalmazott analitikai módszer neve
- A futtatás során keletkezett nyers adatok fájlneve és helye
- A keletkezett csúcsokat és az alapvonalat mutató grafikonfelvétel, úgynevezett trace
- Eredménytáblázat (amely tartalmazza a nyers adatokat és a számított adatokat)
Most már nagyon automatizált folyamat az eredménytáblázat létrehozása, de ez nem volt mindig ilyen egyszerű…
négyzetpapír és olló
Az adatelemzés és a digitális integráció standarddá válása előtt – grafikonpapír és olló minden elemző polcán megtalálható volt.
A detektorhoz kapcsolt grafikoníró közvetlenül a négyzetpapírra vagy grafikonpapírra rögzítette a nyomot egy tintatoll segítségével. A nyomvonalból az eredmények kidolgozására általában két módszert alkalmaztak:
Négyzetek számolása:
Az analitikus vonalzóval és tollal rajzolta ki a legjobb csúcsformát (háromszöget) és alapvonalat. Ezután megszámolta az egyes háromszögekben lévő négyzetek számát. Ezt a számolást a detektor csillapításával együtt felhasználták, és kiszámították a minta összetételét.
Vágás és mérlegelés:
A rögzített csúcsokhoz alapvonalat készítettek. A csúcsokat ezután kivágták és megmérték. A csúcsfelület arányos a tömeggel, feltéve, hogy a papír vastagsága és nedvességtartalma egyenletes. A pontosság növelésére olyan trükköket lehetett alkalmazni, mint a nyomvonal fénymásolása és nagyítása.
Amint az leképezhető, az egymást átfedő csúcsok és a sok különböző összetevőt tartalmazó minták komoly gondot okozhatnak az elemzőnek. Ma már a számítógépek segítenek a hibák csökkentésében.
A kromatogram olvasása
Noha a modern műszerek a papír és ollós időkből a találgatás nagy részét megszüntették, a kromatogram olvasásának és értelmezésének képessége manapság ugyanolyan fontos.
A nyomvonalat mindig ellenőrizni kell, mivel ez lesz az első jel, ha valami baj van a kromatográfiával. Az egyszerű ellenőrzések közé tartozik:
- Az alapvonal rendben van, lapos, nem túl nagy zajjal?
- A csúcsok alakja elfogadható? Nincs túl sok aszimmetria, szép éles és méretarányos
- Megfelelő a csúcsok száma? Vannak extra vagy hiányzó csúcsok?
- A referencia- és belső standard csúcsok helyesen vannak azonosítva, és a retenciós idők rendben vannak?
Bár az összes adatot rögzítették, és az elemző számára számításokat végeztek, az elemző feladata meggyőződni arról, hogy nem történt-e hiba. A modern rendszerek adatelemzésének tárgyalása ebben a cikkben található: Automated Analysis of Open-Access HPLC Instrumentation Metrics.