Na áram membránbuborékokban: a csatornák mobilitásának és a patch clamp felvételnek a következményei

Amikor enzimatikusan disszociált izomrostokból történő felvétel során szívást alkalmaztunk laza patch clamp pipettákra, nagy membránbuborékok keletkeztek a pipettákon belül. Azért kezdeményeztük ezeknek a szívás okozta hólyagoknak a vizsgálatát, mert a hólyagokban lévő ioncsatornák megnehezítenék vagy esetleg érvénytelenítenék a membránáram-sűrűség laza patch-feszültségcsipeszes méréseit. A Na-csatornák alacsony laterális mobilitása (Stühmer és Almers, 1982) és a Na-csatornák meredek gradiensei a véglemezen és az ínhártyán (Caldwell és mtsai., 1986) a Na-csatornák szoros kötődését feltételezik a citoszkeletális elemekhez, és arra vezettek bennünket, hogy kevés Na-csatornát várunk a hólyagokban, ha egyáltalán vannak ilyenek. A hólyagok kialakulása a membránkapacitás növekedését eredményezte, amint az a membránfelület növekedése alapján várható volt. A hólyagképződés a Na-áramot is növelte, ami azt jelzi, hogy a hólyagok Na-csatornákat tartalmaznak. Feltételezve, hogy a megnövekedett kapacitást és Na-áramot a pipettán kívüli membránból mozgó lipidek és Na-csatornák okozták, a hólyagnak a pipettából való kidobása várhatóan visszaállítja a kapacitást és a Na-áramot az eredeti értékekre. A kapacitás valóban visszatért az eredeti értékre, de a Na-áram a vártnál alacsonyabb volt. A Na-áram csökkenése azzal magyarázható, hogy a Na-csatornák a tapaszmembránból a buborékba vándoroltak. A bleb és a folt Na-áramának a megfelelő kapacitásokhoz való normalizálása kimutatta, hogy a bleb membrán Na-csatornasűrűsége majdnem 50%-a a normál felszíni membránénak. Így a bleb membrán nem mentes a fehérjéktől, és nem is igazán reprezentatív a normál felszíni membránnal szemben, amelyből keletkezett. Membránlipidekben gazdag, és viszonylag fehérjében szegény. Két következtetést lehet levonni.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Szólj hozzá!