A sejtblokkolási technika hatékonysága a diagnosztikus citopatológiában | SG Web

Discussion

A különböző sejtblokkolási technikákat már több mint egy évszázada alkalmazzák. A sejtblokkok használatát széles körben szorgalmazzák az FNA-ra alkalmas tömegekkel rendelkező betegek diagnosztikai kivizsgálásában, mivel olyan diagnosztikus építészeti információkat nyújtanak, amelyek kiegészítik az FNA-keneteket.

Ebben a vizsgálatban a Pap-festésű FNA-kenet volt a jobb módszer a rutindiagnózisoknál a nukleáris és citoplazmatikus jellemzők jobb megőrzése miatt, míg a sejtblokk technika alkalmasabb volt az immuncitokémiai elemzésekre. Eredményeink azt sugallják, hogy a sejtblokkminták leginkább az ICC kiegészítőjeként, és nem az elsődleges citológiai diagnózisokhoz használhatók. A sejtek degenerálódása a sejtblokkmintákban annak tulajdonítható, hogy a sejtblokkmintát a gyűjtés után azonnal fixálószerbe merítették, és hogy az FNA-technika személyenként eltérő volt. A technikában mutatkozó eltérések hozzájárulhattak a megfelelő sejtblokkminták nyerésének sikeréhez vagy sikertelenségéhez, ami nagymértékben függ a mintavevő készségétől és a mintavétel magas sejtszintűségétől.

A sejtblokkminták nagy részének a fixálás előtti késleltetése miatt a vizsgálat korai szakaszában a sejtszint (23/47), a morfológia (41/47) és az architektúra (28/47) nem optimális megőrzése volt megfigyelhető. Következésképpen a módszerek között gyenge volt az egyezés és statisztikailag szignifikáns különbség a sejtesség (κ – statisztika = -0,0022; P 0,0006), a morfológiai megőrzés (κ – statisztika = -0,02; P 0,00) és az architektúra megőrzése (κ – statisztika = 0,00; P 0,00) értékelésében. Nem volt olyan FNA-minta (0/47), amely a sejtszintűség tekintetében nulla pontot ért volna el, de a sejtblokk-minták 8,5%-a (4/47) acelluláris volt. E minták 4%-át (2/47) úgy nyerték, hogy a tűt és a fecskendő csücskét kiöblítették, 4%-át pedig úgy nyerték, hogy a sejtblokk-mintához egy külön aspirációt végeztek. A sejtblokkminták 40%-a (19/47) alacsony sejtszintű (1. pontszám) volt, míg az FNA-mintáknak csak 11%-a (5/47). Figyelemre méltó továbbá, hogy több (96%) FNA minta (45/47) mutatott magasabb pontszámot (2. és 3. pontszám) a sejtszintűség tekintetében, mint a sejtblokk minták 57%-a (27/47). Valamennyi FNA-mintában (47/47) megfigyelhető volt az architektúra megőrzése, szemben a sejtblokk-minták mindössze 47%-ával (22/47). A sejtblokk minták többségében (53%) az architekturális megőrzés hiányzott. Ennek ellenére úgy döntöttünk, hogy továbbra is a Formal-Fixx fixálószert használjuk, mivel a fennmaradó minták (24/47, 6/47, illetve 19/47) optimális konzerváltságot mutattak, amit a magasabb osztályozási pontszámok is bizonyítanak. Hanley és munkatársai megállapították, hogy a tumorsejtek antigénezitásának megőrzése elengedhetetlen a pontos immuncitokémiai elemzésekhez, és ebből a szempontból az ideális fixálószer és az optimális szövetfeldolgozási paraméterek használata kulcsfontosságú. Mivel a sejtblokkok fennmaradó mintáiban optimális megőrzést figyeltek meg, az alkalmazott fixálószert és a szövetfeldolgozás ütemezését megfelelőnek ítélték. A megfigyelt szuboptimális konzerválódás a fixálás előtti időeltolódásnak tudható be.

A mi környezetünkben az FNA-kat túlnyomórészt radiológus és patológus rezidensek végzik, akiknek tapasztalata és képzettsége változó. Következésképpen a sejtblokkoláshoz szükséges anyagot általában 3-4 aspiráció után szívták le a hagyományos FNA-kenethez, amely elsőbbséget élvezett. Ez hozzájárulhatott ahhoz, hogy a minta traumatizáltabb és rosszabbul konzervált legyen. Sok esetben (20/47) nem végeztek külön átvételt a sejtblokk mintákhoz. A maradék FNA-mintát tartalmazó fecskendőt csupán átöblítették sejtblokkfixáló oldattal. Ezekben az esetekben a minták 65%-a (13/20) nem volt optimális sejtszintű (0 és 1 pont). 30/47 sejtblokk-mintánál egy külön tűs aspirációt helyeztek közvetlenül a Shandon’s Formal-Fixx fixálót tartalmazó injekciós üvegbe, és 60% (18/30) megfelelő sejtszintűséget mutatott (2 és 3 pontszám). Ez azt bizonyítja, hogy a sejtblokkoláshoz dedikált tűs aspiráció javítja a hozamot.

A Bardi és Schwartz által levont következtetés azt jelzi, hogy a betegek és az aspirátorok gondolkodásmódja egyaránt fontos. Néhány beteg nem járult hozzá a sejtblokk-mintához szükséges extra tűs aspirációhoz, míg sok aspirátor vonakodott további tűs aspirációkat végezni a betegek tájékozott beleegyezése ellenére. Ennek oka vagy az volt, hogy a beteg nem bírta az eljárást, vagy az, hogy a tüdő FNA-n átesett betegeknél fennállt a pneumothorax kialakulásának kockázata, vagy az, hogy a tömeg nem volt alkalmas az FNA-ra, vagy az idő rövidsége, tapasztalatlansága, vagy egyszerűen csak nem volt hajlandó erre. Bár statisztikailag nem nyilvánvaló, a sejtblokk technikához gyűjtött minták hátrányos helyzetbe kerülhettek, mivel nem kaptak külön aspirációt. A fentiek mindegyike hozzájárulhatott a sejtblokkok gyenge celluláris, morfológiai és architekturális megőrzéséhez, valamint a két mintaelőkészítési módszer közötti gyenge egyezéshez.

A CK7 immunfestésnél gyenge volt az egyezés, amely az egyetlen olyan vizsgálat volt, amely statisztikailag szignifikáns különbséget (P 0,02) mutatott a módszerek között. A CK7 vizsgálatot 44 mintán végezték el. Ezek közül 34% (15/44) negatív volt a sejtblokk mintában és 13,6% (6/44) az FNA mintákban. Az immunfestékek háttér (BG) / nem specifikus festődésének értékelése során statisztikailag szignifikáns különbséget kaptunk ezen eltérés tekintetében a CK7 (K 0,03; P-érték 0,0001), CK20 (K 0,01; P-érték 0,00), TTF1 (K 0,00; P-érték 0,03) és synaptophysin immunfestékek (K 0,15; P-érték 0,03) esetében. Minden esetben több sejtblokk-mintában nem volt háttérfestés (pontszám 0), mint az FNA-mintákban. Nem specifikus aberráns festődés nem volt megfigyelhető a megfelelő sejtblokk negatív kontrollokban és a párosított AE 1/3 immunfestésekben. E jelenség lehetséges magyarázata az, hogy nem minden antigén érzékeny az anoxikus lebomlásra vagy diffúzióra, ahogyan a fixálás sem minden antigénre egyformán hat. A háttér és az anomális festődés által leginkább érintett FNA-minták néhány máj FNA-minta, fehérjetörmeléket tartalmazó minták és túlnyomórészt nekrotikus vagy nagyon vastagon elkenődött minták voltak, ami arra utal, hogy a probléma belső eredetű. Kung és munkatársai hasonló megfigyelést tettek az erősebb festődési intenzitás, a nem specifikus festődés hiánya és az aberráns festődés hiánya tekintetében a sejtblokk mintákban, különösen a citokeratin festések esetében.

Diszkrét eredményeket kaptak egy minta – egy máj FNA – esetében. Az ezen a keneten végzett immuncitokémia tumorsejt-pozitivitást mutatott a CK7 és a synaptophysin tekintetében, míg a CK20 negatív volt. Ez a citokeratin profil a tüdő neuroendokrin karcinómáinak 56%-ában figyelhető meg. A megfelelő sejtblokk-mintán elvégzett ugyanezek a vizsgálatok negatívak voltak. Bár mindhárom vizsgálatot megismételtük, az eredmények nem változtak. A lehetséges magyarázat lehet a tumorsejtek antigénjeinek nem optimális megőrzése ebben a mintában, amelyet valamilyen módon érzékenyebbé tettek, mint a többit.

A jövőbeni kutatásoknak ezen az osztályon előnyös lenne a 10%-os semleges pufferelt formalin (NBF) mint a sejtblokk minták immunhisztokémiai (IHC) előkészítéséhez választott fixálószer használata a minta gyűjtése és a fixálás közötti időtartam csökkentésével. Az Amerikai Patológusok Kollégiumához tartozó, az immunhisztokémia szabványosításával foglalkozó ad-hoc bizottság lebeszélt a nem formalin alapú fixálószerek és/vagy alternatív fixálási módszerek használatáról. Ennek oka, hogy az IHC-vizsgálat teljesítményére vonatkozó adatok más fixálószerek használatával korlátozottak, és a meglévő adatokból történő extrapoláció megbízhatatlan. Axe és munkatársai olyan sejtblokkokat állítottak elő a máj FNA-jából, amelyeket 10%-os NBF-ben fixáltak a sejtek optimális megőrzésével és sikeres IHC-vel, így lehetővé téve a tumor alosztályozását.

A Shandon Cytoblock Cell Block Preparation System használatával lehetővé vált a kis sejtcsoportok rögzítése. Varsegi és Shidham kidolgozott egy továbbfejlesztett technikát a sejtblokk-előkészítésre és a sejtek befogására, amelyet előnyös lehet beépíteni a jelenlegi módszerbe. A Varsegi-féle technika alkalmazása növeli az esélyét annak, hogy a Histogel (Thermo Shandon) használatával az egyedileg szétszórt sejtek megragadhatók, így elkerülhető, hogy a hisztotechnológus túl mélyen vágjon bele a blokkba, és ezzel kockáztassa, hogy a kívánt sejteket tartalmazó területet kihagyja. Bár statisztikailag nem nyilvánvaló, a sejtblokk technikához gyűjtött minták hátrányos helyzetbe kerülhettek azáltal, hogy nem kaptak kezdeti dedikált aspirációt, ami veszélyeztethette a sejtek minőségét. Ebben a tekintetben meg kell vizsgálni, hogy a sejtblokkoláshoz több dedikált tűszúrásból származó anyagot nyerjünk a hozam javítása érdekében.

A sejtblokk-előkészítés szerepe a diagnosztikus citopatológiában kétségkívül óriási jelentőségű, mivel több speciális vizsgálatot tesz lehetővé, és következésképpen finomabb citológiai diagnózist tesz lehetővé. A módszertan továbbfejleszthető a technikák módosításával és az ebben a tanulmányban felvetett korlátok csökkentésével, azaz a 10%-os semleges pufferelt formalin (NBF) mint az immunhisztokémiai (IHC) sejtblokk-minták előkészítéséhez választott fixálószer használatának feltárásával, a mintagyűjtés és a fixálás közötti időtartam csökkentésével és az FNA-technika standardizálásával a személyzet körében. A közvetlen FNA-kenetek és a sejtblokkok kiegészítik egymást, és eredményeink azt mutatják, hogy mindkettőre szükség van a betegek diagnosztikai vizsgálatában; az előbbire a morfológia értékeléséhez, az utóbbira pedig az optimális immuncitokémiai eredményekhez. Az erőforrás-korlátozott körülmények között az összes FNA-anyagon mind a hagyományos, mind a blokkolt kenetek elvégzésének költségvonzatai további értékelést igényelnek.

Szólj hozzá!