De met-mutanten zijn Met auxotrofen, wat betekent dat ze niet in staat zijn te groeien in media die geen Met bevatten. Auxotrofen zijn micro-organismen die door een genmutatie niet in staat zijn een essentiële voedingsstof te synthetiseren. Veel laboratoriumstammen dragen meerdere mutaties die de synthese van essentiële voedingsstoffen belemmeren. Omdat bijvoorbeeld de BY4742-stam mutaties draagt in de genen HIS3, LEU2, LYS2 en URA3, zal de stam alleen groeien in media die histidine, leucine, lysine en uracil bevatten. Auxotrofe stammen worden in de genetica veelvuldig gebruikt. Onderzoekers gebruiken vaak auxotrofe stammen als gastheer voor plasmidetransformatie (hoofdstuk 12). De plasmiden die voor transformatie worden gebruikt, dragen functionele allelen van een gen dat defect is in de gaststam, waardoor het mogelijk wordt om transformanten te selecteren op hun vermogen om te groeien op media zonder de essentiële voedingsstof.
Synthetische media zijn een essentieel hulpmiddel voor het kweken en bestuderen van auxotrofen, omdat alle componenten gedefinieerd zijn. Gist onderzoekers hebben een verscheidenheid van verschillende formuleringen voor synthetische media ontwikkeld. Alle synthetische media bevatten een koolstofbron (gewoonlijk D-glucose), een stikstofbron, en essentiële vitaminen en mineralen. De vitaminen en mineralen worden gewoonlijk gekocht
in een formulering die bekend staat als giststikstofbasis (YNB). De supplementen die aan synthetische media worden toegevoegd, kunnen op maat worden gemaakt om de groei van bepaalde genotypen te ondersteunen of tegen te gaan. In deze cursus gebruiken we Yeast Complete (YC), een medium dat de groei van de meeste S. cerevisia-stammen ondersteunt. De groeisnelheid van wild-type stammen in YC is iets langzamer dan die in rijke media zoals YPD, maar de stammen zijn gedurende lange perioden levensvatbaar. De tabel op de volgende bladzijde toont de samenstelling van YC, dat een rijk aanbod aan aminozuren en nucleotidebasen bevat. Naast het volledige YC-medium zullen we ook selectieve media gebruiken waarin sommige componenten zijn weggelaten. In dit practicum zullen we bijvoorbeeld YC-Met “drop-out” medium gebruiken, dat alle YC-componenten in de volgende tabel bevat, behalve methionine.
