Autoradiografie

Autoradiography

Autoradiografie van een Southern Blot

Autoradiografie is een klasse technieken waarbij de posities van met radio-isotopen gelabeld biologisch materiaal een autoradiogram (“self-picture”) maken. Radio-isotopen zoals 14C, 32P, 35S zenden straling uit die fotografische of röntgenfilm belicht. Substitutie van 32P in de ruggengraat van DNA, of 35S in de zwavelhoudende aminozuren maakt het mogelijk gelabelde moleculen te detecteren..

Een Southern Blot-filter wordt in een lichtdichte cassette (links) geplaatst en bedekt met een vel röntgenfilm. De cassette wordt gesloten en blijft enkele uren tot enkele dagen staan. Het met radio-isotopen gelabelde DNA belicht de film, die na ontwikkeling een patroon van zwarte banden laat zien die de posities van gelabeld DNA in de blot aangeven. In drie van de vier hoeken worden uitlijningspunten aangebracht met speciale inkt die ook de film belicht. Met behulp van de drie uitlijntekens kan de blot worden uitgelijnd met de film (met de uitlijntekens is slechts één uitlijning mogelijk). Bij sommige experimenten kan de uitlijning worden gebruikt om een bepaalde DNA-band op de blot te lokaliseren en deze uit te knippen, zodat het DNA voor verdere experimenten kan worden teruggewonnen.

Plaats een reactie