Het ASPM-gen komt tot expressie in prolifererende weefsels en codeert voor een mitotisch spileiwit

De meest voorkomende oorzaak van primaire autosomaal recessieve microcefalie (MCPH) blijkt mutaties te zijn in het ASPM-gen dat betrokken is bij de regulatie van neurogenese. Het voorspelde genproduct bevat twee vermoedelijke N-terminale calponine-homologie (CH) domeinen en een blok van vermoedelijke calmoduline-bindende IQ domeinen die gebruikelijk zijn in actine-bindende cytoskelet- en signaleringseiwitten. Eerdere studies in de muis suggereren dat ASPM bij voorkeur tot expressie komt in de zich ontwikkelende hersenen. Onze analyses tonen aan dat ASPM wijdverspreid tot expressie komt in foetale en volwassen weefsels en geüpreguleerd wordt in maligne cellen. Verschillende alternatief gesplicte varianten die coderen voor vermeende ASPM isovormen met verschillende aantallen IQ motieven werden geïdentificeerd. Het belangrijkste ASPM transcript bevat 81 IQ domeinen, waarvan de meeste georganiseerd zijn in een hogere orde herhaalde (HOR) structuur. Een andere prominente gesplicte vorm bevat een in-frame deletie van exon 18 en codeert 14 IQ domeinen die niet georganiseerd zijn in een HOR. Deze variant is geconserveerd in de muis. Andere gesplitste varianten die zowel CH domeinen als een deel van de IQ motieven missen werden ook gedetecteerd, wat wijst op het bestaan van isovormen met mogelijk verschillende functies. Om de biochemische functie van menselijke ASPM op te helderen, ontwikkelden we peptide-specifieke antilichamen tegen de N- en C-termini van ASPM. In een westerse analyse van eiwitten van gekweekte menselijke en muiscellen, detecteerden de antilichamen banden met mobiliteiten die overeenkomen met de voorspelde ASPM-isovormen. Immunokleuring van gekweekte menselijke cellen met antilichamen toonde aan dat ASPM gelokaliseerd is in de spindelpolen tijdens mitose. Deze bevinding suggereert dat MCPH het gevolg is van een stoornis in de mitotische spindelregulatie in corticale progenitors als gevolg van mutaties in ASPM.

Plaats een reactie