Na-stroom in membraan blebs: implicaties voor kanaalmobiliteit en patch clamp opnamen

Wanneer zuiging werd toegepast op losse patch clamp pipetten tijdens opnamen van enzymatisch gedissocieerde spiervezels, vormden zich grote membraan blebs binnen de pipetten. We begonnen een studie van deze zuiging-geïnduceerde blebs omdat ionkanalen in de blebs zou bemoeilijken of mogelijk ongeldig losse patch spanningsklem metingen van membraan stroomdichtheid. De lage laterale mobiliteit (Stühmer en Almers, 1982) en steile gradiënten van Na-kanalen bij de eindplaat en de pees (Caldwell et al., 1986) impliceren een nauwe binding van Na-kanalen aan cytoskeletelementen en leidden ons ertoe weinig of geen Na-kanalen in de blebs te verwachten. Blebvorming veroorzaakte een toename in membraancapaciteit, zoals verwacht uit de toename in membraanoppervlak. Blebvorming verhoogde ook de Na-stroom, wat erop wijst dat de blebs Na-kanalen bevatten. Ervan uitgaande dat de verhoogde capaciteit en Na-stroom het gevolg waren van lipide en Na-kanalen die zich van het membraan buiten de pipet bewogen, werd verwacht dat het uitwerpen van de bleb uit de pipet de capaciteit en Na-stroom terug zou brengen naar hun oorspronkelijke waarden. De capaciteit keerde terug naar de oorspronkelijke waarde, maar de Na-stroom was lager dan verwacht. De afname van de Na-stroom wordt verklaard door Na-kanalen die van het patchmembraan naar de bleb bewegen. Normalisatie van de bleb en patch Na-stroom naar hun respectievelijke capaciteiten toonde aan dat bleb membraan een Na-kanaal dichtheid had van bijna 50% van die van normale oppervlakte membraan. Het bleb membraan is dus noch verstoken van proteïnen, noch echt representatief voor het normale oppervlaktemembraan waaruit het is ontstaan. Het is verrijkt in membraanlipiden en is relatief eiwitarm. Twee conclusies kunnen worden getrokken.(ABSTRACT VERTROKKEN OP 250 WOORDEN)

Plaats een reactie