Veel Gestelde Vragen: BLAT

door

Topics

  • BLAT vs. BLAST
  • BLAT vindt helemaal geen sequentie of niet alle verwachte overeenkomsten
  • BLAT of In-Silico PCR vindt meerdere overeenkomsten zoals chr_alt of chr_fix ook al wordt er maar één verwacht
  • BlAT gebruiksbeperkingen
  • BlAT broncode en documentatie downloaden
  • Web-gebaseerde BLAT parameters kopiëren in command-line versie
  • Gebruik van de -ooc vlag
  • Repliceren van web-gebaseerde BLAT procent identiteit en score berekeningen
  • Repliceren van web-gebaseerde BLAT “I’m feeling lucky” zoekresultaten
  • Gebruik van BLAT voor korte sequenties met maximale gevoeligheid
  • BLAT ALLE genomen
  • BLAT ALLE genomen: Geen overeenkomsten gevonden
  • Benaderen van web-gebaseerde BLAT resultaten met behulp van gfServer/gfClient
  • Standalone of gfServer/gfClient resultaat startposities af door één

Terug naar FAQ Inhoudsopgave

BLAT vs. BLAST

Wat zijn de verschillen tussen BLAT en BLAST?

BLAT is een uitlijningstool zoals BLAST, maar het is anders gestructureerd. Op DNA, BLAT werkt door het houden van een index van een volledig genoom in het geheugen. De doel-database van BLAT is dus niet een set GenBank sequenties, maar in plaats daarvan een index die is afgeleid van de assemblage van het volledige genoom. Standaard bestaat de index uit alle niet-overlappende 11-mers, behalve die welke sterk betrokken zijn bij herhalingen, en gebruikt hij minder dan een gigabyte RAM. Deze kleinere omvang betekent dat BLAT veel gemakkelijker te spiegelen is dan BLAST. Blat van DNA is ontworpen om snel sequenties te vinden van 95% en meer overeenkomst met een lengte van 40 basen of meer. Het kan meer afwijkende of kortere sequentie-uitlijningen missen. (De standaard instellingen en het verwachte gedrag van standalone Blat zijn iets anders dan die op de grafische versie van BLAT.)

Op eiwitten gebruikt BLAT 4-mers in plaats van 11-mers, en vindt eiwit-sequenties van 80% en meer overeenkomst met de query met een lengte van 20+ aminozuren. De proteïne index heeft iets meer dan 2 gigabyte RAM nodig. In de praktijk — als gevolg van sequentie-divergentiesnelheden gedurende evolutionaire tijd — werkt DNA BLAT goed binnen mensen en primaten, terwijl proteïne Blat goede overeenkomsten blijft vinden binnen gewervelde landdieren en zelfs vroegere organismen voor geconserveerde proteïnen. Binnen de mens geeft proteïne Blat een veel beter beeld van genfamilies (paralogen) dan DNA Blat. BLAST en psi-BLAST bij NCBI kunnen echter veel verder verwijderde overeenkomsten vinden.

Uit praktisch oogpunt heeft BLAT verschillende voordelen boven BLAST:

  • snelheid (geen wachtrijen, antwoord in seconden) tegen de prijs van minder homologie diepte
  • de mogelijkheid om een lange lijst van gelijktijdige queries in fasta formaat
  • vijf handige output sorteer opties
  • een directe link naar de UCSC browser
  • uitlijningsblok details in natuurlijke genomische volgorde
  • een optie om de uitlijning later te starten als onderdeel van een aangepast spoor

BLAT wordt vaak gebruikt om de locatie van een sequentie in het genoom op te zoeken of de exon structuur van een mRNA te bepalen, maar ervaren gebruikers kunnen grote batch jobs uitvoeren en de interne parametergevoeligheid wijzigen door command-line Blat op hun eigen Linux server te installeren.

BLAT kan geen sequentie vinden of niet alle verwachte overeenkomsten

Ik kan met BLAT geen sequentie vinden hoewel ik zeker weet dat die in het genoom zit. Doe ik iets verkeerd?

Ten eerste, controleer of je de juiste versie van het genoom gebruikt. Bijvoorbeeld, twee versies van het menselijk genoom zijn momenteel in gebruik (hg19 en hg38) en uw sequentie is misschien slechts in een van hen. In veel gepubliceerde artikelen wordt de assemblageversie niet vermeld, zodat het nodig kan zijn beide versies te proberen.

Zeer korte sequenties die over een splice site in een cDNA-sequentie gaan, kunnen niet worden gevonden, omdat ze niet in het genoom voorkomen. qPCR-primers zijn een typisch voorbeeld. Probeer voor deze gevallen In-Silico PCR te gebruiken en een genreeks als doel te kiezen. In het algemeen is het In-Silico PCR gereedschap gevoeliger en verdient het de voorkeur voor paren primers.

Een ander problematisch geval is het zoeken naar sequenties in herhalingen of transposons.BLAT slaat de meest repetitieve delen van de query over en beperkt het aantal matches dat het vindt, wat leidt tot ontbrekende matches voor deze herhaalde sequenties.De online versie van BLAT maskeert 11mers uit de query die meer dan 1024 keer in het genoom voorkomen en beperkt de resultaten tot 16 matches per chromosoomstreng. Dit betekent dat maximaal 32 locaties per chromosoom worden teruggegeven. Dit is gedaan om de snelheid te verbeteren, maar kan resulteren in gemiste hits wanneer u zoekt naar sequenties in herhalingen.

Vaak voor herhaalde sequenties kunt u het zelf-ketenspoor gebruiken om de andere matches te vinden, maar alleen als de andere matches lang en specifiek genoeg zijn. U kunt controleren of een sequentie aanwezig is op een bepaalde plaats door gebruik te maken van de “Short match” track als uw sequentie is minder dan 30 bp.U kunt werken rond deze minimale lengte beperking door het toevoegen van meer flankerende sequentie aan uw query om de query uniek genoeg te maken. Als dit niet mogelijk is, is het enige alternatief om de executables van BLAT en het .2bit bestand van een genoom naar je eigen machine te downloaden en BLAT op de opdrachtregel te gebruiken. Zie Downloaden van BLAT broncode en documentatie voor meer informatie. Wanneer u de opdrachtregelversie van BLAT gebruikt, kunt u de repMatch-optie op een grote waarde zetten om te proberen het vinden van matches in repeterende regio’s te verbeteren en geen van de standaard 11.ooc repeat masking-bestanden te gebruiken.

BLAT of In-Silico PCR vindt meerdere matches zoals chr_alt of chr_fix, ook al wordt er maar één verwacht

Ik zie twee of meer matches in het genoom hoewel er maar één zou moeten zijn. Wat zijn deze extra matches?

Dit komt meestal voor bij de nieuwere genoomassemblages, zoals hg38, wanneer u een sequentie zoekt die een “alternate” of “fix” sequentie heeft. Om de kwaliteit van deze assemblages te verbeteren, hebben curatoren meerdere versies van sommige belangrijke loci toegevoegd, b.v. de MHC regio’s. Ze hebben ook fix sequenties toegevoegd om fouten op te lossen zonder de referentie te wijzigen. Zie onze blogpost over patches voor meer informatie.

Wanneer u een sequentie blat of isPCR die overeenkomt met een chromosoomlocatie die ook een fix- of alt-sequentie heeft, ziet u een match op het referentiechromosoom (bijv. “chr1”) en een andere match op de patch-sequentie (bijv. chr1_KN196472v1_fix). In de meeste gevallen is het veilig om de patch hit te negeren, aangezien een menselijk genoom niet tegelijkertijd zowel de referentie- als de alternate sequentie zal bevatten. Voor meer informatie over de specifieke soorten patch sequenties zie onze FAQ entry over het onderwerp.

BLAT gebruiksbeperkingen

Ik heb een waarschuwing ontvangen van uw Blat server die me informeert dat ik de server gebruiksbeperkingen heb overschreden. Kunt u mij informatie geven over de UCSC Blat server gebruik parameters?

Wegens de grote vraag naar onze Blat servers, beperken wij de service voor gebruikers die de BLAT tool programmatisch bevragen of grote batch queries doen. Programmatisch gebruik van BLAT is beperkt tot een maximum van een hit elke 15 seconden en niet meer dan 5.000 hits per dag. Gelieve batch queries te beperken tot 25 sequenties of minder.

Voor gebruikers met grote hoeveelheden Blat verzoeken, raden wij aan het BLAT programma te downloaden voor lokaal gebruik. Voor meer informatie, zie BLAT source en documentatie downloaden.

Downloaden van BLAT source en documentatie

Is de BLAT source beschikbaar om te downloaden? Is documentatie beschikbaar?

BLAT broncode en uitvoerbare bestanden zijn vrij beschikbaar voor academisch, niet-commercieel en persoonlijk gebruik. Informatie over commerciële licenties is beschikbaar op de Kent Informatics website.

BLAT broncode kan worden gedownload van http://hgdownload.soe.ucsc.edu/admin/ (te vinden op /kent/src/blat binnen de meest recente jksrci*.zip source tree). Voor BLAT executables, ga naar http://hgdownload.soe.ucsc.edu/admin/exe/ en kies uw machinetype.

Documentatie over BLAT programma specificaties is hier beschikbaar. Merk op dat de command-line BLAT geen matches teruggeeft met U nucleotiden in de query sequentie.

Repliceren van web-based Blat parameters in command-line versie

Ik ben mijn eigen Blat server aan het opzetten en zou graag dezelfde parameterwaarden willen gebruiken die de UCSC web-based Blat server gebruikt.

We verwachten bijna altijd kleine verschillen tussen de hgBLAT/gfServer en de stand-alone, command-line Blat. De beste overeenkomsten kunnen worden gevonden met de hulpprogramma’s pslReps en pslCDnaFilter. De web-gebaseerde Blat is permissief afgesteld met een minimum cut-off score van 20, die de meeste alignments zal weergeven. Het is raadzaam te bepalen welke filterparameters het meest zinvol zijn voor het experiment of de analyse. Vaak zullen deze instellingen anders en strenger zijn dan die van het webgebaseerde Blat. Gebruik daarom de volgende instellingen om de zoekresultaten van de web-gebaseerde Blat te benaderen:

Noot: Er zijn gevallen waarin de gfServer/gfClient benadering een betere benadering van de web-resultaten oplevert dan de standalone Blat. Zie het onderstaande voorbeeld voor een overzicht van dit proces.

standalone Blat:

  • Blat zoeken:
    blat -stepSize=5 -repMatch=2253 -minScore=20 -minIdentity=0 database.2bit query.fa output.psl
  • Opmerking: Om webresultaten te repliceren, moet PSL-uitvoer worden gebruikt. BLAT behandelt alternatieve uitvoerformaten (zoals blast8) enigszins anders, en dit kan leiden tot kleine verschillen in de resultaten; met name voor korte uitlijningen. Bovendien moeten alle U-nucleotiden van de querysequentie worden geconverteerd naar T-nucleotiden of moet de vlag “-q=rna” worden gebruikt om overeen te komen met de web-BLAT.

faToTwoBit:

  • Gebruikt zachte maskering om Fasta-formaat te converteren naar het 2-bits formaat voor BLAT-invoer.

gfServer (zo zijn de webgebaseerde BLAT-servers van UCSC geconfigureerd):

  • BLAT-server (geschikt voor PCR):
    gfServer start blatMachine portX -stepSize=5 -log=untrans.log database.2bit
  • vertaalde BLAT-server:
    gfServer start blatMachine portY -trans -mask -log=trans.log database.2bit

Om DNA/DNA- en DNA/RNA-matches mogelijk te maken, zijn alleen de host, de poort en de twoBit-bestanden nodig. Dezelfde poort wordt gebruikt voor zowel onvertaalde Blat (gfClient) als PCR (webPcr). U heeft een aparte Blat server op een aparte poort nodig om vertaalde Blat (eiwit-zoekopdrachten of vertaalde zoekopdrachten in eiwit-ruimte) mogelijk te maken.

gfClient:

  • Stel -minScore=0 en -minIdentity=0. Dit zal resulteren in enkele laag scorende, over het algemeen onechte treffers, maar voor interactief gebruik is het voldoende eenvoudig om deze te negeren (omdat de resultaten op score worden gesorteerd) en soms komen de laag scorende treffers van pas.

Noten over repMatch:

  • De standaard instelling voor gfServer dna matches is: repMatch = 1024 * (tileSize/stepSize).
  • De standaard instelling voor Blat dna matches is: repMatch = 1024 (als tileSize=11).
  • Om command-line resultaten te krijgen die gelijkwaardig zijn aan web-gebaseerde resultaten, moet repMatch worden gespecificeerd bij gebruik van BLAT.

Voor meer informatie over hoe de score en procentuele identiteit matches te repliceren die worden weergegeven door onze web-gebaseerde Blat, zie deze BLAT FAQ.

Voor meer informatie over de parameters die beschikbaar zijn voor BLAT, gfServer, en gfClient, zie de BLAT specificaties.

Gebruik van de -ooc vlag

Wat doet de -ooc vlag?

Gebruik van een -ooc optie in BLAT, zoals -ooc=11.ooc, versnelt zoekopdrachten vergelijkbaar met repeat-masking sequence. Het 11.ooc bestand bevat sequenties waarvan is vastgesteld dat ze oververtegenwoordigd zijn in de genoomsequentie. Om de zoeksnelheid te verbeteren, worden deze sequenties niet gebruikt bij het seeden van een alignment tegen het genoom. Voor sequenties van redelijke grootte zal dit geen probleem opleveren en de verwerkingstijd aanzienlijk verkorten.

Door het 11.ooc-bestand niet te gebruiken, verhoogt u de uitlijningstijd, maar verhoogt u ook de gevoeligheid enigszins. Dit kan belangrijk zijn als u kortere sequenties of sequenties van slechte kwaliteit aligneert. Bijvoorbeeld, als een bepaalde sequentie voornamelijk bestaat uit sequenties in het 11.ooc bestand, zal het nooit correct worden gezaaid voor een uitlijning als de -ooc vlag wordt gebruikt.

Samenvattend, als u bepaalde sequenties niet vindt en u zich de extra verwerkingstijd kunt veroorloven, wilt u misschien BLAT uitvoeren zonder het 11.ooc bestand als uw specifieke situatie het gebruik ervan rechtvaardigt.

Repliceren van web-based Blat procentuele identiteit en score berekeningen

Hoe kan ik, gebruikmakend van mijn eigen command-line Blat server, de procentuele identiteit en score berekeningen repliceren die door web-based Blat worden geproduceerd?

Er is geen optie voor command-line Blat die u het procentuele ID en de score geeft. We hebben echter scripts gemaakt die de berekeningen bevatten:

  • Bekijk het perl script vanuit de broncode boom: pslScore.pl
  • Bekijk het corresponderende C programma: pslScore.c en bijbehorende bibliotheekfuncties pslScore en pslCalcMilliBad in psl.c

Zie onze FAQ over broncode licenties en downloads voor informatie over het verkrijgen van de broncode.

Repliceren van web-gebaseerde Blat “Ik voel me gelukkig” zoekresultaten

Hoe genereer ik dezelfde zoekresultaten als web-gebaseerde Blat’s “Ik voel me gelukkig” optie met behulp van command-line Blat?

De code voor de “Ik voel me gelukkig” Blat zoekopdracht ordent de resultaten op basis van de sorteer uitvoer optie die u hebt geselecteerd op de query pagina. Het geeft dan de hoogst scorende uitlijning van de eerste query sequentie.

Als u de resultaten sorteert op “query, start” of “chrom, start”, het genereren van de “I’m feeling lucky” resultaat is rechttoe rechtaan: sorteer het uitvoerbestand op deze kolommen, thenenselect the top resultaat.

Om een van de sorteeropties met score te repliceren, moet u eerst de score voor elk resultaat in uw PSL-uitvoerbestand berekenen, en vervolgens de resultaten sorteren op score of een andere combinatie (bijvoorbeeld “query, score” en “chrom, score”). Zie de sectie over het repliceren van webgebaseerde Blat procentidentiteit en scoreberekeningen voor informatie over het berekenen van de score.

Als alternatief kunt u proberen uw Blat PSL-uitvoer te filteren met behulp van hetpslReps of pslCDnaFilter programma dat beschikbaar is in de broncode van de Genome Browser. Voor informatie over het verkrijgen van de broncode, zie onze FAQ over broncode licenties en downloads.

Het gebruik van BLAT voor korte sequenties met maximale gevoeligheid

Hoe configureer ik BLAT voor korte sequenties met maximale gevoeligheid?

Hier volgen enkele richtlijnen voor het configureren van standalone Blat en gfServer/gfClient voor deze condities:

  • De formule om de kortste query grootte te vinden die een match garandeert (als overeenkomende tiles niet gemarkeerd zijn als overgebruikt) is: 2 * stepSize + tileSize – 1
    Voorbeeld, met stepSize ingesteld op 5 en tileSize ingesteld op 11, zullen matches van query grootte 2 * 5 + 11 – 1 = 20 bp gevonden worden als de query exact overeenkomt met het doel.
    De parameter stepSize kan variëren van 1 tot tileSize.
    De parameter tileSize kan variëren van 6 tot 15. Voor eiwitten begint het bereik lager.
    Voor minMatch=1 (bijv., eiwit), is de minimale gegarandeerde lengte van de overeenkomst: 1 * stepSize + tileSize – 1
    Note: Er is ook een “minimum geluksgrootte” voor treffers. Dit is de kleinst mogelijke treffer die BLAT kan vinden. Deze minimum geluksgrootte kan berekend worden met de formule: stepSize + tileSize. Bijvoorbeeld, als we een tileSize van 11 en stepSize van 5 gebruiken, worden hits kleiner dan 16 bases niet gerapporteerd.
  • Probeer -fine.
  • Gebruik een grote waarde voor repMatch (b.v. -repMatch = 1000000) om de kans te verkleinen dat een tile als over-gebruikt gemarkeerd wordt.
  • Gebruik geen .ooc bestand.
  • Gebruik niet -fastMap.
  • Gebruik geen maskerende command-line opties.

De bovenstaande veranderingen zullen BLAT gevoeliger maken, maar zullen ook de snelheid vertragen en het geheugengebruik verhogen. Het kan nodig zijn om één chromosoom tegelijk te verwerken om het geheugengebruik te verminderen.

Een opmerking over het filteren van de uitvoer: het verhogen van de -minScore parameterwaarde voorbij de helft van de query-grootte heeft geen verder effect. Gebruik daarom het pslReps of pslCDnaFilter programma dat beschikbaar is in de broncode van de Genome Browser om te filteren op de gewenste grootte, score, dekking, of kwaliteit. Voor informatie over het verkrijgen van de broncode, zie onze FAQ over broncode licenties en downloads.

Blat ALLE genomen

Hoe blat ik queries voor de standaard genoom assemblies van alle organismen?

BLAT is ontworpen om snel sequentie gelijkenis tussen query en doel sequenties te vinden. Over het algemeen wordt BLAT gebruikt om locaties van sequentiehomologie in een enkel doelgenoom te vinden of de exonstructuur van een mRNA te bepalen. Met BLAT kunnen gebruikers ook de querysequentie vergelijken met alle standaardassemblages voor organismen die op de UCSC Genome Browser staan. De zoek ALL functie kan nuttig zijn als u een dubbelzinnige query sequentie heeft en probeert te bepalen tot welk organisme deze kan behoren.

Het selecteren van de “Zoek ALL” checkbox boven de Genome drop-down lijst stelt u in staat om de genomen van de standaard assemblies voor al onze organismen te doorzoeken. Het doorzoekt ook alle Blat servers van aangesloten hubs, wat betekent dat u uw door gebruikers gegenereerde assemblage hubs kunt doorzoeken. De resultatenpagina toont een geordende lijst van al onze organismen en hun homologie met uw querysequentie. De resultaten zijn zo gerangschikt dat het organisme met de beste alignmentscore bovenaan staat, wat aangeeft welke regio(‘s) van dat organisme de grootste homologie heeft (hebben) met uw querysequentie. De volledige alignment, inclusief mismatches en hiaten, moet een score van 20 of hoger hebben om in de Blat-uitvoer te verschijnen. Door te klikken op een link in de Assemblage lijst wordt u naar een nieuwe pagina gebracht die verschillende locaties en scores van sequentie homologie in de assemblage van belang weergeeft.

Blat ALLE genomen: Geen overeenkomsten gevonden

Mijn Blat ALL resultaten tonen assemblies met hits, maar er op klikken geeft geen overeenkomsten

In de Blat ALL resultaten pagina, geeft de “Hits” kolom geen alignments weer, in plaats daarvan rapporteert het tile hits. Tile hits zijn 11 base kmer matches gevonden in het target, die niet noodzakelijk succesvolle alignments vertegenwoordigen. Wanneer men op de link ‘Assemblage’ klikt, wordt een volledige Blat-uitlijning voor dat genoom uitgevoerd en alle uitlijningsscores die minder dan een resultaat van 20 bp opleveren, komen terug als geen overeenkomsten gevonden.

Wanneer u een sequentie aan het Blat ALL-hulpprogramma voorlegt, wordt de sequentie vergeleken met een index in de server. De index is opgebouwd uit het doelgenoom, met een standaardstapgrootte van 11 bp. Deze 11-mers “betegelen” de sequentie als volgt:

TGGACAACATG GCAAGAATCAG TCTCTACAGAA

Nadat de index is opgebouwd, bestaat de eerste stap van de alignment uit het lezen van de query (zoek)sequentie, het extraheren van alle 11-mers, en het opzoeken van die 11-mers in de genoom 11-mer index die zich op dat moment in het geheugen bevindt. De matches die daar gevonden worden, zijn de eerste “hits” die je ziet op de Blat ALL resultaten pagina. De volgende stap is het zoeken naar hits die elkaar overlappen of binnen een bepaalde afstand van elkaar vallen, en proberen de sequenties tussen de hit-locaties in doel en query uit te lijnen.

Bijvoorbeeld, als twee 11-base tile hits perfect uitlijnen, zou dat resulteren in een score van 22. Dit is boven de minimaal vereiste score van 20 (zie Blat ALL genomes), en zou worden gerapporteerd als een uitlijning. Er zijn echter straffen voor hiaten en mismatches, en ook voor mogelijke overlap (zie stapgrootte in de BLAT-specificaties), die de score allemaal onder 20 kunnen brengen. In dat geval zou Blat ALL 2 “hits” melden, maar klikken in de assemblage zou geen matches melden. Dit gebeurt meestal wanneer er slechts een paar (1-3) hits door Blat ALL worden gerapporteerd.

Benaderen van web-based Blat resultaten met behulp van gfServer/gfClient

Vaak levert het gebruik van de gfServer/gfClient een betere benadering of zelfs replicatie op van de web-based Blat resultaten, die anders niet kunnen worden gevonden met behulp van standalone Blat. Deze benadering imiteert de Blat server die gebruikt wordt door de web-gebaseerde Blat van de Genome Browser. Het volgende voorbeeld toont hoe een hg19 gfServer kan worden opgezet, en vervolgens een query kan worden gemaakt. Download eerst het juiste hulpprogramma voor het besturingssysteem en geef het uitvoerbare rechten:

#For linuxrsync -a rsync://hgdownload.soe.ucsc.edu/genome/admin/exe/linux.x86_64/blat/ ./#For MacOSrsync -a rsync://hgdownload.soe.ucsc.edu/genome/admin/exe/macOSX.x86_64/blat/ ./chmod +x gfServer gfClient blat

Daarna downloadt u het juiste .2bit genoom (hg19 in dit voorbeeld), en voert u het gfServer hulpprogramma uit met de web Blat parameters, waarbij u de lokale machine en poort 1234 opgeeft:

wget http://hgdownload.soe.ucsc.edu/goldenPath/hg19/bigZips/hg19.2bit./gfServer start 127.0.0.1 1234 -stepSize=5 hg19.2bit

Na enkele ogenblikken zal de gfServer initialiseren en klaar zijn om queries te ontvangen. Om web Blat te benaderen, zullen we de gfClient gebruiken met de volgende parameters, die onze invoer- en uitvoerbestanden aangeven.

./gfClient -minScore=20 -minIdentity=0 127.0.0.1 1234 . input.fa out.psl

Het uitvoerbestand out.psl zou resultaten moeten geven die erg lijken op web-gebaseerde Blat.

Standalone of gfServer/gfClient resultaat start posities off by one

Mijn standalone Blat resultaten of gfServer/gfClient Blat resultaten hebben een startpositie die één minder is dan wat ik zie op web Blat resultaten

Dit is te wijten aan hoe we interne coördinaten opslaan in de Genome Browser. Het standaard Blat Output type van hyperlink toont resultaten in onze interne coördinaten datastructuur. Deze interne coördinaten hebben een begin op nul en een eind op één. Zie het volgende FAQ item voor meer informatie.

Als het Output type wordt veranderd in psl op web Blat, zullen dezelfde op nul gebaseerde half open coördinaat resultaten worden gezien als de standalone Blat en gfServer/gfClient procedures.

Plaats een reactie