Een chromatogram is in wezen de output van een chromatografierun. Het is een elektronisch bestand of een hardcopy met de informatie die tijdens de chromatografierun is gegenereerd.
Er zijn veel verschillende variaties op wat er op een chromatogram wordt weergegeven – afhankelijk van de instellingen die in elk laboratorium worden gebruikt en eventuele wettelijke vereisten. Als voorbeeld kan het minimum dat op een GC-run van een in-process monster wordt getoond, zijn:
- Bemonsteridentificatie (Product, batchnummer, stadiumnummer)
- Bemonsterinformatie (gewicht of concentratie van het monster)
- Datum en tijdstip waarop de injectie is verricht
- Naam of identificatie van de analist
- Instrumentidentificatie en naam van de gebruikte analysemethode
- Filienaam en locatie van ruwe gegevens die tijdens de run zijn gegenereerd
- Kaartopname met de gegenereerde pieken en de basislijn, bekend als een spoor
- Resultaatentabel (met ruwe gegevens en berekende gegevens)
Heden ten dage is het een zeer geautomatiseerd proces om een resultaatentabel te genereren, maar het was niet altijd zo eenvoudig.
Vierkant papier en schaar
Voordat data-analyse en digitale integratie de standaard werden – waren grafiekpapier en schaar te vinden op de plank van elke analist.
Een chart recorder, gekoppeld aan de detector, legde het spoor direct vast op vierkant papier of grafiekpapier met behulp van een inktpen. Uit het spoor werden gewoonlijk twee methoden gebruikt om de resultaten te berekenen:
Hoekjes tellen:
De analist gebruikte een liniaal en pen om de beste piekvorm (driehoek) en basislijn te tekenen. Vervolgens werd het aantal vierkantjes in elke driehoek geteld. Dit aantal werd vervolgens samen met de demping van de detector gebruikt en de samenstelling van het monster werd berekend.
Snijden en wegen:
Er werd een basislijn geconstrueerd voor de pieken die werden geregistreerd. De pieken werden vervolgens uitgesneden en gewogen. Het piekoppervlak is evenredig met het gewicht, mits de dikte en het vochtgehalte van het papier uniform zijn. Trucs zoals het fotokopiëren van het spoor en het vergroten van het spoor konden worden gebruikt om de nauwkeurigheid te vergroten.
Zoals kan worden afgebeeld, kunnen overlappende pieken en monsters die veel verschillende bestanddelen bevatten, een analist voor ernstige problemen stellen. Nu helpen computers de fouten te verminderen.
Het lezen van een chromatogram
Hoewel moderne instrumentatie veel van het giswerk uit de tijd van papier en schaar heeft verwijderd, is het kunnen lezen en interpreteren van een chromatogram tegenwoordig net zo belangrijk.
Het spoor moet altijd worden gecontroleerd, omdat dit de eerste aanwijzing zal zijn als er iets mis is gegaan met de chromatografie. Eenvoudige controles zijn:
- Ziet de basislijn er goed uit, vlak met niet te veel ruis?
- Zijn de vormen van de pieken acceptabel? Niet te veel asymmetrie, mooi scherp en op schaal
- Is er het juiste aantal pieken? Zijn er extra of ontbrekende pieken?
- Zijn de referentie- en interne-standaardpieken correct geïdentificeerd, en zijn de retentietijden OK?
Hoewel alle gegevens zijn geregistreerd en de berekeningen voor de analist zijn gemaakt, is het de taak van de analist om zich ervan te vergewissen dat er geen fouten zijn gemaakt. Een bespreking van gegevensanalyse in moderne systemen is te vinden in dit artikel: Automated Analysis of Open-Access HPLC Instrumentation Metrics.