Autoradiografia

Autoradiography

Autoradiografia Southern Blot

Autoradiografia jest klasą technik, w których pozycje materiału biologicznego znakowanego radioizotopami tworzą autoradiogram („obraz własny”). Radioizotopy takie jak 14C, 32P, 35S emitują promieniowanie, które naświetla kliszę fotograficzną lub rentgenowską. Substytucja 32P do szkieletu DNA lub 35S do aminokwasów zawierających siarkę pozwala na wykrycie znakowanych cząsteczek..

Filtr Southern Blot jest umieszczany wewnątrz światłoszczelnej kasety (po lewej) i pokrywany arkuszem błony rentgenowskiej. Kasetę zamyka się i pozostawia na kilka godzin do kilku dni. Znakowany radioizotopem DNA naświetla błonę, która po wywołaniu ukazuje wzór czarnych pasm wskazujących położenie znakowanego DNA w bibule. Znaki wyrównania w trzech z czterech rogów są wykonane specjalnym tuszem, który również naświetla błonę. Plamka może być wyrównana z błoną za pomocą trzech znaków indeksowych (przy tych znakach możliwe jest tylko jedno wyrównanie). W niektórych eksperymentach, wyrównanie może być wykorzystane do zlokalizowania określonego pasma DNA na bibule i wycięcia go, aby odzyskać DNA do dalszych eksperymentów.

Dodaj komentarz