Purpose: Ostatnio udowodniono, że kilka technik odwrotnej transkrypcji-PCR jest przydatnych do wykrywania krążących mikroprzerzutów. Jednak w ten sposób nie można było wykryć nienaruszonych skupisk komórek, które w eksperymentach na zwierzętach miały znaczenie prognostyczne. W tym badaniu dokonano oceny i modyfikacji komercyjnej, opartej na cytokeratynie, immunomagnetycznej metody separacji komórek w celu wykrycia nienaruszonych skupisk komórek u pacjentów z rakiem jelita grubego.
Projekt eksperymentalny: Ocenie poddano 32 pacjentów z rakiem jelita grubego (6 było w stadium B wg Dukesa, 13 w stadium C i 13 w stadium D) oraz 20 próbek zdrowych dawców. Immunomagnetyczny rozdział komórek przeprowadzono z warstwy zbuforowanej próbek krwi obwodowej (20 ml) przy użyciu zestawu Carcinoma Cell Enrichment Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Niemcy), unikając jakichkolwiek etapów filtrowania. Wzbogacona frakcja komórek była cytowirowana i znakowana immunocytochemicznie przy użyciu przeciwciała pancytokeratyny (MNF116; Dako).
Wyniki: Spośród 20 zdrowych próbek, 2 zawierały jedną komórkę cytokeratynododatnią. Spośród 32 pojedynczych próbek pochodzących z przypadków złośliwych, 24 zawierały komórki cytokeratynododatnie. Skupiska komórek nowotworowych, dublety komórek mieszanych (jedna komórka cytokeratynowa dodatnia i -ujemna) oraz skupiska komórek mieszanych wykryto u 22 z 24 pacjentów. W sześciu przypadkach wykryto cytokeratynopodobne komórki dendrytyczne. Dane z obserwacji wskazują, że chemioterapia nie jest w stanie zniszczyć wszystkich krążących skupisk komórek nowotworowych.
Wnioski: Stosując przedstawione metody, mogliśmy wykryć krążące komórki raka jelita grubego i skupiska komórek u pacjentów z rakiem jelita grubego. Podobne struktury komórkowe opisywano wcześniej tylko u szczurów. Obecne dane dowodzą, że takie struktury są obecne również w raku jelita grubego u ludzi.