Chromatogram jest zasadniczo wynikiem badania chromatograficznego. Jest to plik elektroniczny lub wydruk zawierający informacje wygenerowane podczas przebiegu chromatografii.
Istnieje wiele różnych wariantów tego, co jest pokazywane na chromatogramie – w zależności od ustawień stosowanych w każdym laboratorium i wszelkich wymogów prawnych. Na przykład, minimalna wartość pokazana na chromatogramie GC próbki w trakcie procesu może być następująca:
- Identyfikacja próbki (Produkt, numer partii,
- Informacja o próbce (masa lub stężenie próbki)
- Data i godzina wykonania iniekcji
- Nazwa lub identyfikacja analityka
- Identyfikacja przyrządu i nazwa zastosowanej metody analitycznej
- Nazwa i lokalizacja surowych danych wygenerowanych podczas przebiegu
- Zapis wykresu przedstawiający wygenerowane piki i linię podstawową, znany jako ślad
- Tablica wyników (zawierająca dane surowe i dane obliczone)
Obecnie generowanie tablicy wyników jest w dużym stopniu procesem zautomatyzowanym, ale nie zawsze było to takie proste…
Kwadratowy papier i nożyczki
Zanim analiza danych i integracja cyfrowa stały się standardem – papier i nożyczki znajdowały się na półce każdego analityka.
Rejestrator wykresów, połączony z detektorem, zapisywał ślad bezpośrednio na kwadratowym papierze lub papierze graficznym za pomocą pióra z tuszem. Na podstawie śladu, istniały dwie metody powszechnie stosowane do opracowania wyników:
Liczenie kwadratów:
Analityk używał linijki i pióra do narysowania najlepszego kształtu piku (trójkąta) i linii podstawowej. Liczba kwadratów w każdym trójkącie została następnie policzona. Liczba ta została następnie wykorzystana wraz z tłumieniem detektora i obliczono skład próbki.
Cięcie i ważenie:
Stworzono linię podstawową dla pików, które zostały zarejestrowane. Następnie piki zostały wycięte i zważone. Powierzchnia piku jest proporcjonalna do wagi, pod warunkiem, że grubość papieru i zawartość wilgoci są jednolite. Sztuczki takie jak fotokopiowanie śladu i powiększanie śladu mogą być stosowane w celu zwiększenia precyzji.
Jak można sobie wyobrazić, nakładające się piki i próbki zawierające wiele różnych składników mogą powodować poważne problemy dla analityka. Obecnie komputery pomagają ograniczyć te błędy.
Odczytywanie chromatogramu
Mimo że nowoczesne oprzyrządowanie usunęło wiele zgadywania z czasów papieru i nożyczek, umiejętność odczytywania i interpretowania chromatogramu jest obecnie równie ważna.
Ślad powinien być zawsze sprawdzany, ponieważ będzie to pierwsza wskazówka, czy coś poszło nie tak z chromatografią. Proste kontrole obejmują:
- Czy linia podstawowa wygląda OK, płasko i nie za dużo szumu?
- Czy kształty pików są do przyjęcia? Nie za dużo asymetrii, ładne i ostre i w skali
- Czy jest odpowiednia liczba pików? Czy są jakieś dodatkowe lub brakujące piki?
- Czy piki wzorca odniesienia i wzorca wewnętrznego są prawidłowo zidentyfikowane, a czasy retencji są w porządku?
Choć wszystkie dane są rejestrowane, a obliczenia wykonywane dla analityka, to zadaniem analityka jest upewnienie się, że nie popełniono żadnych błędów. Dyskusja na temat analizy danych w nowoczesnych systemach znajduje się w tym artykule: Automated Analysis of Open-Access HPLC Instrumentation Metrics.
.