Abstract
W 1992 roku przedstawiliśmy nową metodę sekwencjonowania białek z karboksy-końca (C-terminus) (Boyd et al., 1992). W ciągu ostatnich 2 lat kontynuowaliśmy nasze badania, włączając w to mechanizm początkowej aktywacji C-końcowej grupy karboksylowej oraz celowe modyfikacje reaktywnych łańcuchów bocznych aminokwasów za pomocą odczynników sekwencjonujących. Poprzez dobór odczynników i warunków reakcji stosowanych w naszym protokole sekwencjonowania, kwas asparaginowy, kwas glutaminowy, seryna i treonina ulegają derywatyzacji. Amidacja kwasu asparaginowego i glutaminowego oraz acetylacja seryny i treoniny doprowadziły do poprawy wydajności sekwencjonowania tych reszt. Kwas asparaginowy i glutaminowy są obecnie sklasyfikowane, jak widać w Tabeli 1, jako reszty aminokwasowe, które łatwo poddają się sekwencjonowaniu. Naszym kryterium określenia, czy dana reszta jest wiarygodnie nazwana, jest możliwość sekwencjonowania i wykrycia tej reszty, gdy jest ona obecna w jednym nanomolu próbki białka. Średnio, możliwe jest sekwencjonowanie 5 cykli na jednym nanomolu białka naniesionego na membranę z dyfluorku poliwinylidenu (PVDF), jeśli sekwencja aminokwasowa zawiera reszty wymienione w kolumnie „wiarygodnie nazwane” w Tabeli 1. Na konferencji MPSA w 1994 r. skoncentrujemy się na zilustrowaniu obecnej użyteczności tej metody sekwencjonowania C-końcowego w sekwencjonowaniu białek unieruchomionych na PVDF.
.