Autoradiografia de um Mancha do Sul
Autoradiografia é uma classe de técnicas em que as posições do material biológico marcado com radioisótopo fazem um autoradiograma (“auto-fotograma”). Radioisótopos como o 14C, 32P, 35S emitem radiação que expõe filme fotográfico ou de raios X. A substituição de 32P na espinha dorsal do DNA, ou 35S no aminoácidos contendo enxofre permite que moléculas rotuladas sejam detectadas..
Um filtro Southern Blot é colocado dentro de uma caixa de casetas à prova de luz (esquerda) e sobreposto a uma folha de filme de raios X. A cassete é fechada e deixada por várias horas a vários dias. O DNA marcado com radioisótopo expõe o filme, que quando desenvolvido mostra um padrão de faixas pretas que indicam as posições do DNA marcado no blot. As marcas de alinhamento em três dos quatro cantos são feitas com tinta especial que também expõe o filme. A mancha pode ser alinhada com o filme por meio das três marcas de índice (com as tuas marcas, só é possível um alinhamento). Em alguns experimentos, o alinhamento pode ser usado para localizar uma determinada faixa de DNA na mancha e cortá-la, para recuperar o DNA para outros experimentos.