huFcγRIII
huFcγRIII (CD16) liga IgG1 e IgG3 com um Ka de ∼ 4 × 106 M-1 (Kurlander e Batker, 1982) e é expresso em macrófagos, células naturais assassinas (NK), neutrófilos, eosinófilos e algumas células T (Anderson, 1989). O Sr. de huFcγRIII varia entre 50K e 70K (Fleit et al, 1982). Estudos de imunoprecipitação de lisados de células NK e neutrófilos usando um mAb específico huFcγRIII seguido por deglicosilação e SDS-PAGE revelaram proteínas centrais de diferentes valores Mr nos dois tipos de células (Lanier et al., 1988). Experiências subsequentes de clonagem de cDNA demonstraram que a célula NK transcreve um mRNA distinto do dos neutrófilos (Scallon et al., 1989; Ueda et al., 1989; Ravetch e Perussia, 1989; Edberg et al., 1989; Selvaraj et al., 1989). Assim, pelo menos dois genes codificam huFCγRIIIs: huFcγRIII-1 em neutrófilos e huFcγRIII-2 em células NK e macrófagos.
huFcγRIII-1, ao contrário de todos os outros FcγRs, está ancorado à membrana da célula neutrofílica através de uma ligação GPI e pode ser liberado da membrana celular por uma fosfolipase C específica de fosfo-inossitol (Selvaraj et al., 1989; Edberg et al., 1989; Ravetch e Perussia, 1989; Scallon et al., 1989; Ueda et al., 1989). A estimulação dos neutrófilos com peptídeos quimiotáticos formil-Met-Leu-Phe resultou na liberação de huFcγRIII-1 da membrana neutrofílica (Huizinga et al., 1988). Se isto foi devido a clivagem proteolítica ou ativação de uma fosfolipase C não é claro. A alteração de um único aminoácido no domínio de ligação GPI de huFcγRIII-1 resulta na ancoragem da proteína por um domínio de membrana tansmembrana com uma cauda curta citoplasmática (Kurosaki e Ravetch, 1989; Lanier et al., 1989a).
As com huFcγRII, existem dois alótipos (NA1 e NA2) para huFcγRIII-1. Estas diferenças alotípicas podem causar neutropenia auto-imune em lactentes (Lalezari et al., 1986). Duas formas receptoras (19 e 21 kDa) nos neutrófilos foram distinguidas após a desglicosilação seguida pela SDS-PAGE (Edberg et al., 1989). O padrão de expressão dos tipos receptores de 19 e 21 kDa correlacionou-se com o padrão de expressão do marcador alotípico NA1 e NA2. A discriminação entre estes allótipos (NA1 e NA2) foi possível utilizando mAbs CLB-GRAN11 e GRM1, respectivamente (Huizinga et al., 1990a).
A maior parte das funções neutrófilas mediadas por FcγR são acreditadas como transduzidas por huFcγRII, apesar de haver muito mais sites huFcγRIII-1, 135.000 sites por neutrofil (Fleit et al., 1982), do que sites huFcγRII, ∼10.000 por neutrofil (Anderson, 1989). ADCC de eritrócitos de galinha, revestidos com heteroanticorpos compostos de fragmentos de Fab anti-CE e anti-huFcγR mAbs, foi mediado através de huFcγRII e huFcγRIII sobre neutrófilos (Graziano et al., 1989a). No entanto, os neutrófilos não conseguiram matar uma linha celular anti-huFcγRIII hybridoma. Trabalhos recentes demonstraram que o huFcγRIII-1 pode desencadear a liberação de hidrolases, mas não um estouro respiratório, ao ser reticulado (Huizinga et al., 1990b). Isto pode explicar a lise observada de EC mas não de células de hibridoma mediadas por huFcγRIII-1.
A alta densidade de huFcγRIII-1 em neutrófilos pode servir para focar complexos imunes na superfície celular onde eles podem interagir e desencadear huFcγRII. De fato, estudos (Looney et al., 1986b; Tetteroo et al., 1987) sugerem que principalmente huFcγRIII está envolvido na aderência dos neutrófilos aos eritrócitos revestidos por IgG. Da mesma forma, huFcγRIII-1 foi essencial para a ligação de pequenos complexos imunológicos aos neutrófilos, enquanto que huFcγRII apenas reforçou fracamente esta ligação (Huizinga et al., 1989a). No entanto, este papel de ligação essencial do huFcγRIII-1 não se estendeu a grandes complexos imunológicos, e pacientes com hematúria paroxística noturna, com apenas 10% dos níveis normais de huFcγRIII-1, tiveram respostas metabólicas normais à IgG-latex (Huizinga et al., 1989a). Foi encontrada uma paciente com lúpus eritematoso sistêmico (LES) que não expressou huFcγRIII-1 em seus neutrófilos, devido a uma provável deleção do gene huFcγRIII-1 (Clark et al., 1990). Os neutrófilos da paciente tiveram capacidade reduzida para rosetas de eritrócitos revestidos com IgG, como sugerido por estudos anteriores da função neutrofílica (Looney et al., 1986b; Tetteroo et al., 1987). Entretanto, este paciente não apresentou nenhuma suscetibilidade incomum a infecções bacterianas, e os níveis de outras proteínas ligadas ao GPI e huFcγRII eram normais. Oito outros pacientes diagnosticados com LES tinham níveis normais de huFcγRIII-1. Uma percentagem substancial (25%) de neutrófilos em homens infectados com HIV eram negativos para a expressão huFcγRIII-1, mas os níveis de outras proteínas ligadas ao GPI e huFcγRII eram normais (Boros et al., 1990b). A subpopulação huFcγRIII-negativa foi maior na síndrome de deficiência autoimune (AIDS) – pacientes diagnosticados e abusadores de drogas intravenosas infectados pelo HIV, em comparação com homossexuais infectados pelo HIV e homens-controle não infectados. O mecanismo responsável pela perda do huFcγRIII-1 e as consequências fisiológicas desta expressão alterada ainda não foram examinados. Os níveis de huFcγRIII no soro são relatados a variar durante o curso da SIDA, com um aumento inicial e uma subsequente diminuição dos níveis de huFcγRIII no soro nos estágios terminais da doença (Khayat et al., 1990).
huFcγRIII-2 tem uma proteína central Mr ligeiramente maior que a huFcγRIII-1 (∼ 24K versus ∼ 20K) e é uma glicoproteína de membrana tipo I com um único domínio transmembrana e domínio citoplasmático (Unkeless, 1989a). huFcγRIII-2 é a forma de huFcγRIII encontrada em macrófagos e células NK. O domínio transmembrana é altamente homólogo ao de moFcγRIIα e da cadeia α de raFc∈RI, incluindo um trecho idêntico de oito aminoácidos.
huFcγRIII-2 em células NK medeia o ADCC após reticulação (Werfel et al., 1989). A ligação cruzada complexa imunológica do receptor também induziu a transcrição do receptor interleucina-2, IFN-γ, e TNF-α, todos os quais ativam a atividade das células NK (Anegon et al., 1988). Portanto, além de atuar como ativador do ADCC em células NK, a ativação do huFcγRIII-2 em células NK também potencializa a atividade assassina natural e independente de Ig- das células NK. A capacidade dos anticorpos anti-LFA-1 (CD11a) de inibir o ADCC huFcγRIII-2 mediado pelas células NK sugere o envolvimento deste receptor de adesão na posição celular alvo durante o ADCC mediado pela NK (Werfel et al., 1989). Da mesma forma, em monócitos mas não linfócitos, o bloqueio do LFA-1 inibiu o ADCC que é mediado através da ligação cruzada de huFcγRs (Graziano et al., 1989b).
Os pequenos subconjuntos de células NK expressam pouco ou nenhum huFcγRIII-2 (Lanier et al., 1986). O nível de expressão huFcγRIII pode significar diferentes estágios de desenvolvimento na linhagem de células NK. As células NK de baixo nível ou nãohuFcγRIII-2-exprimindo células NK proliferam mais extensivamente em resposta à rIL-2 (Nagler et al., 1989). O estágio mais maduro, baseado na baixa capacidade proliferativa, alta abundância no sangue e alto potencial citotóxico, consiste em células NK expressando abundante huFcγRIII-2.
Um número de estudos demonstrou que huFcγRIII-2 sobre macrófagos no baço e sobre células Kupffer é o receptor primário responsável pela depuração de grandes complexos imunes. Nos chimpanzés, o anti-huFcγRIII mAb 3G8 inibiu a depuração in vivo de eritrócitos autólogos revestidos com anticorpos dirigidos contra um antígeno de grupo sanguíneo menor (Clarkson et al., 1986b). mAb 3G8 foi testado como um potencial tratamento terapêutico para indivíduos com púrpura trombocítica imunológica, uma doença na qual os pacientes secretam altos níveis de anticorpos antiplaquetários (Clarkson et al., 1986a). O tratamento de um paciente resultou num aumento dramático dos níveis de plaquetas, regressando aos níveis normais dentro de 2 semanas. Infelizmente, um segundo tratamento deu uma resposta muito menos dramática. A sensibilização ao mAb murino pode reduzir a sua eficácia.
hufcγRIII em monócitos cultivados é bioquimicamente indistinguível da das células NK (Klaassen et al., 1990). Relata conflito sobre se huFc7RIII é uma molécula gatilho para ADCC por macrófagos. A adição de anti-huFcγRIII mAb, CLB-FcR-GRAN1, não reduziu a atividade lítica de monócitos cultivados contra eritrócitos sensibilizados com 4 × 104 moléculas por eritrócito de diferentes variantes de interruptor isotípico (IgG1, IgG2a, e IgG2b) de um mAb murino ou quantidades iguais de um IgG3 a partir de uma linha de células de um hibridoma murino diferente (Klaassen et al., 1990). Foram tomadas medidas para garantir que os experimentos fossem feitos abaixo da atividade lítica máxima do outro huFcγR em monócitos cultivados, a fim de poder detectar inibição por mAb CLB-FcR-GRAN1. Entretanto, macrófagos peritoneais, mesmo monócitos frescos, foram claramente capazes de matar uma linha de células de hibridoma anti-FcγRIII (HC 3G8) (Graziano et al., 1989b). Esta foi a primeira evidência de que huFcγRIII-2 pode ser funcionalmente detectável em monócitos frescos. A discrepância na capacidade de matar pode ser devida às diferentes células-alvo e mAbs usados em cada estudo.
FcγRs pode exacerbar a infecção por HIV das células portadoras do FcγR na presença de anticorpos anti-HIV. HuFcγRIII-2 expresso em macrófagos mediados por anticorpos dependentes de macrófagos (Homsy et al., 1989). Os anticorpos dirigidos contra huFcγRIII-2 bloquearam este efeito, enquanto que os anticorpos anti-huFcγRI ou anti-huFcγRII não o fizeram. A observação de que a infecção pelo HIV-1 pode prosseguir independentemente da interação CD4-gp120 é reforçada pela observação de que os fibroblastos infectados pelo citomegalovírus, expressando uma codificação viral FcγR, podem ser infectados pelos complexos imunes do HIV-1, e esta infecção pode ser bloqueada por agregados IgG (McKeating et al., 1990).