A inibição da enzima conversora da angiotensina (ECA) oferece um meio útil de administrar a hipertensão, porque os inibidores da ECA (ECAI) são conhecidos por servirem como agentes com propriedades anti-hipertensivas, além de gerarem resultados metabólicos e cardioprotetores positivos. Contudo, as ACEIs actuais estão ligadas a consequências adversas, pelo que existe a necessidade de compostos eficazes mas mais seguros, o que pode ser conseguido através da síntese química ou do isolamento de moléculas bioactivas obtidas naturalmente. Os hidrolisados de proteínas com actividade ACEI podem ser produzidos pela combinação de pepsina e proteólise pancreatina (para imitar a digestão gastrointestinal) da proteína de sementes longan. Este estudo examinou os hidrolisados de proteína de semente longan, obtidos a partir de uma digestão sequencial de 3 h com pepsina e depois pancreatina. O hidrolisado resultante foi submetido a um fraccionamento sequencial de membrana de ultrafiltração com um corte de 10, 5, e 3 kDa de peso molecular (MWCO). O permeado derivado de <3 kDa MWCO demonstrou a maior atividade ACEI. Este permeado foi subsequentemente submetido à separação por cromatografia líquida de alta performance em fase reversa para dar as frações principais com base em diferentes tempos de eluição. Os valores ACEI IC50 para estas frações foram então identificados. Para determinar a massa peptídeo do pico maior (F5), que se mostrou ser Glu-Thr-Ser-Gly-Met-Lys-Pro-Thr-Glu-Leu (ETSGMKPTEL) e Ile-Ser-Ser-Met-Gly-Ile-Leu-Val-Cys-Leu (ISSMGILVCL), foi utilizada a espectrometria de massa em tandem quadripolar. Estes dois peptídeos foram estáveis na faixa de temperatura e pH de -20 a 90 °C e 2-12, respectivamente, por 60 min. Da trama Lineweaver-Burk, ambos os peptídeos inibiram a ECA de forma não competitiva. A simulação de acoplamento molecular dos peptídeos com ECA suportou a formação de ligações de hidrogênio pelos peptídeos com as bolsas ativas da ECA. Esta pesquisa indica que pode ser possível usar ambos os peptídeos ou hidrolisados de proteína de semente longan para criar ingredientes para alimentos funcionais, ou para produzir produtos farmacêuticos, capazes de diminuir a hipertensão.