Na current in membrane blebs: implications for channel mobility and patch clamp recording

When suction was applied to loose patch clamp pipettes while recording from enzymatically dissociated muscle fibers, large membrane blebs formed within the pipettes. Iniciamos um estudo dessas bolhas induzidas por sucção porque os canais de íons nas bolhas complicariam ou possivelmente invalidariam as medidas da tensão do patch clamp da densidade da corrente da membrana. A baixa mobilidade lateral (Stühmer e Almers, 1982) e os gradientes acentuados dos canais de Na na placa terminal e tendão (Caldwell et al., 1986) implicam uma ligação apertada dos canais de Na aos elementos citoesqueléticos e levaram-nos a esperar poucos, ou nenhuns, canais de Na nas bolhas. A formação de bolhas produziu um aumento na capacitância da membrana, como esperado pelo aumento da área da membrana. A formação de bolhas também aumentou a corrente de Na, indicando que as bolhas continham canais de Na. Assumindo que o aumento da capacidade e da corrente de Na era devido aos canais de Na e lipídios que se deslocavam da membrana para fora da pipeta, era esperado que a ejecção da bolha da pipeta trouxesse a capacidade e a corrente de Na de volta aos seus valores originais. A capacitância voltou ao seu valor original, mas a corrente de Na era menor do que o esperado. A diminuição da corrente de Na é explicada pelo movimento dos canais de Na da membrana do adesivo para a bolha. A normalização da corrente de Na da bolha e do patch para suas respectivas capacitâncias revelou que a membrana da bolha tinha uma densidade de canal de Na quase 50% da da membrana de superfície normal. Assim, a membrana da bolha não é nem desprovida de proteínas nem verdadeiramente representativa da membrana superficial normal da qual ela surgiu. Ela é enriquecida em lipídios de membrana e é relativamente pobre em proteínas. Duas conclusões podem ser tiradas (ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

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